Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-hnRNP K para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P61978

Especificaciones y parámetros principales del producto

Información biológica: Función y localización de hnRNP K

• hnRNP K es una proteína principal de unión a pre-ARNm con alta afinidad por secuencias de poli(C), y desempeña un papel central en el metabolismo de hnARN, el empalme y el procesamiento de ARNm.
• Es un mediador crítico de la respuesta al daño del ADN de p53/TP53, y funciona como coactivador transcripcional (cuando se sumoila) para genes como p21/CDKN1A y represor mediante interacciones con ARN no codificantes como lincRNA-p21, regulando así la apoptosis y la detención del ciclo celular.
• Como parte de un complejo ribonucleoproteico que contiene ZNF827, HNRNPL y circZNF827, hnRNP K regula negativamente la transcripción de genes involucrados en la diferenciación neuronal (PubMed:33174841). Referencias relacionadas: PMID:33174841
• La proteína se localiza dinámicamente en múltiples compartimentos subcelulares: núcleo, nucleoplasma, citoplasma y podosomas, lo que coincide con sus funciones en el procesamiento de ARN, la señalización y la adhesión celular.
• hnRNP K sufre modificaciones postraduccionales extensas, que incluyen fosforilación, acetilación, metilación, sumoilación y glicosilación, que modulan su actividad, localización y redes de interacción.
• Posee actividad de unión al ADN de cadena simple y está implicada en interacciones huésped-virus, lo que pone de manifiesto sus contribuciones multiformes a la homeostasis celular y la patogénesis.
• El empalme alternativo del pre-ARNm de HNRNPK genera múltiples isoformas, aunque sus distinciones funcionales no están completamente caracterizadas aquí.
• Las palabras clave de UniProt incluyen: procesamiento de ARNm, spliceosoma, regulación transcripcional, activador, represor y discapacidad intelectual, lo que subraya sus amplias funciones reguladoras en la expresión génica y la enfermedad.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético que abarca los aminoácidos 1-100 de la hnRNP K humana; la alineación de secuencia con los ortólogos de ratón y rata muestra una homología significativa, lo que respalda la reactividad cruzada informada. Valide la especificidad en su especie y tejido diana.
• En Western blot (WB), se espera una banda predominante alrededor de 49-51 kDa; sin embargo, debido a las modificaciones postraduccionales extensas, se pueden observar múltiples bandas o ligeros cambios de masa. Utilice marcadores de peso molecular adecuados y controles positivos (por ejemplo, lisados de células completas HeLa o HEK293).
• Para inmunohistoquímica (IHC-P) e inmunofluorescencia (IF/ICC), analice los patrones de localización subcelular: espere tinción tanto nuclear como citoplasmática. Optimice la recuperación de antígenos (por ejemplo, buffer de citrato pH 6.0) y los pasos de permeabilización. Considere el uso de marcadores de podosomas para estudios de colocalización.
• En aplicaciones de ELISA, el anticuerpo puede servir como reactivo de captura o detección; sin embargo, las condiciones del ensayo (buffer de recubrimiento, bloqueo, pasos de lavado) y el apareamiento de anticuerpos deben determinarse empíricamente.
• Dada la participación de hnRNP K en la señalización de p53, la evaluación de los cambios de expresión después de la inducción de daño en el ADN (por ejemplo, por doxorrubicina o tratamiento con UV) puede servir como estrategia de validación funcional.

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