Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-HSPA4 para WB, IHC-P, ELISA - P34932

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de HSPA4

• HSPA4 (Proteína 4 de choque térmico de 70 kDa) también se conoce como HSP70RY, APG-2 y miembro 2 de la familia de proteínas de choque térmico H. Está codificada por el gen HSPA4 (también denominado APG2 o HSPH2) en el cromosoma 5 humano.
• Como miembro de la familia Hsp70, HSPA4 presenta un dominio ATPasa altamente conservado y un dominio de unión a sustrato, lo que le permite funcionar como una chaperona molecular dependiente de ATP involucrada en el plegamiento de proteínas y la respuesta al estrés.
• La proteína contiene motivos de unión a nucleótidos, consistentes con su capacidad de unión a ATP, lo cual es esencial para su ciclo de chaperona y su interacción con co-chaperonas.
• Los estudios de localización subcelular indican que HSPA4 es predominantemente citoplasmática, donde ejerce sus funciones de chaperona tanto en condiciones normales como de estrés.
• Las modificaciones postraduccionales de HSPA4 incluyen acetilación, fosforilación y metilación, que pueden regular su actividad, estabilidad o interacciones proteína-proteína.
• El splicing alternativo del transcrito de HSPA4 da lugar a múltiples isoformas, expandiendo potencialmente su diversidad funcional en diferentes contextos celulares.
• HSPA4 se clasifica como una proteína de respuesta al estrés, y su expresión probablemente se aumenta bajo condiciones de estrés celular para prevenir la agregación de proteínas y mantener la proteostasis.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno utilizado para este anticuerpo es un péptido sintético que abarca los aminoácidos 700-800 de HSPA4 humano (P34932). Esta región reside en el dominio C-terminal, que es menos conservado entre los miembros de la familia Hsp70 y puede conferir especificidad al objetivo.
• Para aplicaciones de Western blot (WB), considere utilizar un protocolo estándar de SDS-PAGE desnaturalizante con un marcador de peso molecular que cubra el rango de 94 kDa. Optimice las condiciones de transferencia para proteínas de alto peso molecular y valide la detección con controles positivos apropiados (p. ej., lisados de HeLa o HEK293).
• En inmunohistoquímica (IHC-P), los métodos de recuperación de antígeno (p. ej., recuperación de epítopos inducida por calor a pH 6 o 9) y las diluciones del anticuerpo deben optimizarse empíricamente para cada tipo de tejido para reducir el ruido de fondo y lograr una tinción específica.
• Para ELISA, asegúrese de que el par de antígeno de recubrimiento y anticuerpo de detección haya sido probado exhaustivamente y realice titulaciones en tablero de ajedrez para establecer las concentraciones de trabajo óptimas.
• Dado que este anticuerpo se genera contra un inmunógeno peptídico, puede reconocer epítopos lineales expuestos bajo condiciones desnaturalizantes (p. ej., WB), pero puede necesitar validación en ensayos conformacionales nativos.

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