Anticuerpo monoclonal anti-CD59 humano para citometría de flujo - P13987

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de CD59

• CD59, también conocida como protectina, proteína inhibidora de MAC (MAC-IP), factor de restricción homólogo de 20 kDa (HRF-20) y antígeno 1F5, es una glicoproteína de superficie celular anclada a GPI que actúa como un inhibidor crítico del complejo de ataque a membrana del complemento (MAC).
• Se une al componente C8 (C8A y C8B) del MAC en formación, formando una hoja beta intermolecular que impide la incorporación de múltiples moléculas de C9, bloqueando así la formación del poro osmótico y protegiendo las células humanas de la lisis mediada por el complemento (PubMed:11882685, PubMed:1698710, PubMed:2475111, PubMed:36797260). Referencias relacionadas: PMID:11882685, PMID:1698710, PMID:2475111, PMID:36797260
• Una forma soluble de CD59, presente en la orina, conserva la actividad de unión al complemento pero presenta una capacidad muy reducida para inhibir el ensamblaje de MAC en las membranas celulares.
• La proteína se localiza en la membrana celular a través de un anclaje GPI; también se ha detectado una forma secretada.
• CD59 sufre empalme alternativo y modificaciones postraduccionales que incluyen la formación de enlaces disulfuro, glicación y glicosilación unida a N; las mutaciones en CD59 están asociadas a la anemia hemolítica hereditaria.
• La masa molecular predicha de CD59 es de 14177 Da, lo que coincide con su migración observada de ~14–18 kDa en SDS-PAGE.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca el dominio extracelular (aa 26–101) de la CD59 humana, que incluye los sitios funcionales clave para la unión al MAC; este diseño puede favorecer el reconocimiento de conformaciones nativas correctamente plegadas.
• Para citometría de flujo, se recomienda usar células vivas sin fijar para preservar la CD59 anclada a GPI de la superficie celular; se recomienda el bloqueo del receptor Fc para minimizar la unión no específica.
• Titule el anticuerpo en sus condiciones experimentales específicas para determinar la dilución óptima; proteja el conjugado de la luz y evite ciclos repetidos de congelación-descongelación para mantener la estabilidad del fluoróforo.
• Valide la especificidad usando células positivas para CD59 (por ejemplo, leucocitos) y controles knock-out o deficientes para CD59; la detección complementaria con un marcador de anclaje GPI puede confirmar la localización en membrana.

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