Anticuerpo policlonal anti-Parkin humano para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O60260

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la Parkin

• La Parkin, codificada por el gen PRKN (PARK2), es una ubiquitina-proteína ligasa E3 que funciona dentro de un complejo multiproteico para catalizar la unión covalente de restos de ubiquitina a proteínas sustrato, mediando procesos celulares que incluyen la degradación de proteínas, el control de calidad mitocondrial y la supervivencia celular. Referencias relacionadas: PMID:10888878, PMID:10973942, PMID:11431533

• La Parkin ubiquitina una amplia gama de sustratos, incluyendo SYT11, VDAC1, BCL2, CCNE1, GPR37, RHOT1/MIRO1, MFN1, MFN2, SNCAIP, TOMM20 y ZNF746; puede mediar la monoubiquitinación así como varios enlaces de cadenas de poliubiquitina (Lys-6, Lys-11, Lys-48, Lys-63) dependiendo del contexto celular. Referencias relacionadas: PMID:29311685, PMID:32047033, PMID:10888878, PMID:10973942, PMID:11431533, PMID:19229105, PMID:20889974, PMID:25474007

• Una función clave de la Parkin es mantener la integridad mitocondrial; tras el daño mitocondrial, la fosforilación mediada por PINK1 recluta a la Parkin a la membrana mitocondrial externa, donde ubiquitina proteínas para promover la mitofagia y la fisión mitocondrial, eliminando así los orgánulos disfuncionales. Referencias relacionadas: PMID:11439185, PMID:18957282, PMID:19029340, PMID:24660806, PMID:24784582, PMID:25474007

• La Parkin ubiquitina directamente proteínas de la membrana mitocondrial externa como TOMM20, MFN1, MFN2, MIRO1 y USP30, lo que desencadena la mitofagia y evita la fusión de mitocondrias dañadas con redes saludables; también regula la motilidad mitocondrial a través de la degradación de MIRO1. Referencias relacionadas: PMID:19029340, PMID:19966284, PMID:21753002, PMID:22396657, PMID:23620051

• Más allá de la mitofagia, la Parkin protege a las células de la apoptosis mediante la monoubiquitinación de BCL2 para promover la autofagia, limitando la entrada de calcio mitocondrial y reprimiendo transcripcionalmente a p53; también puede funcionar como un supresor tumoral. Referencias relacionadas: PMID:20889974, PMID:19801972, PMID:32047033, PMID:12719539, PMID:11439185

• Las mutaciones homocigotas o heterocigotas compuestas en PRKN son una causa importante de la enfermedad de Parkinson juvenil autosómica recesiva (PDJ); la Parkin se expresa altamente en el cerebro, especialmente en la sustancia negra, y sus niveles se reducen en el cerebro de pacientes con PARK2 y en muchos tumores. Referencias relacionadas: PMID:9560156, PMID:12719539, PMID:14614460, PMID:19501131

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno cubre los 387 aminoácidos N-terminales de la Parkin humana, lo que sugiere que el anticuerpo puede reconocer múltiples epítopos y podría detectar Parkin endógena así como proteína recombinante.
• Para Western blot, se espera una banda de alrededor de 52 kDa; sin embargo, pueden aparecer bandas menores debido a modificaciones post-traduccionales o isoformas, y se recomienda incluir controles apropiados (por ejemplo, lisados de Parkin-knockout).
• Dada la reactividad cruzada con ratón y rata, este anticuerpo puede ser adecuado para estudiar la Parkin en modelos de roedores de la enfermedad de Parkinson; considere validar el anticuerpo en su sistema específico de tejido o célula usando IHC-P o IF/ICC, con co-tinción para marcadores mitocondriales.
• Las diluciones y condiciones de trabajo óptimas deben determinarse empíricamente para cada aplicación; las diluciones iniciales de 1:500-1:2000 para WB, 1:50-1:200 para IHC-P y 1:50-1:200 para IF/ICC se utilizan comúnmente para anticuerpos policlonales.
• Para ELISA, el anticuerpo puede utilizarse como anticuerpo de captura o detección cuando se combina con un anticuerpo secundario apropiado; el rendimiento puede variar con la presentación del antígeno.

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