Anticuerpo monoclonal Anti-IRE1 para WB, ELISA - O75460

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de IRE1

• IRE1 (también conocido como IRE1P, IRE1a o hIRE1p) es una serina/treonina-proteína quinasa y endorribonucleasa de ~110 kDa codificada por el gen ERN1 en humanos.
• IRE1 sirve como un sensor crítico en la respuesta a proteínas desplegadas (UPR) del retículo endoplásmico (RE). En condiciones basales, su dominio luminal se mantiene inactivo al unirse a HSPA5/BiP. La acumulación de proteínas mal plegadas desencadena la liberación, homodimerización, autofosforilación y activación de su dominio endorribonucleasa. Referencias relacionadas: PMID:11175748, PMID:11779464, PMID:12637535, PMID:21317875
• El dominio endorribonucleasa activado escinde específicamente 26 nucleótidos del ARNm de XBP1, generando un transcrito empalmado que codifica un potente factor de transcripción que impulsa la expresión de genes diana de la UPR. Referencias relacionadas: PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390
• IRE1 es una proteína transmembrana residente en el RE, con sus dominios quinasa y RNasa orientados hacia el citoplasma, y funciona como una señal proximal para las vías de tráfico no convencional mediadas por estrés del RE, como la entrega de CFTR a la membrana plasmática a través de la modulación de GORASP2 y SEC16A. Referencias relacionadas: PMID:21884936, PMID:28067262
• La proteína sufre múltiples modificaciones postraduccionales que incluyen fosforilación, ADP-ribosilación y glicosilación, y alberga motivos funcionales clave: un dominio quinasa que se une a ATP, un sensor luminal estabilizado por enlaces disulfuro y un sitio activo endorribonucleasa dependiente de metal.
• IRE1 se expresa de manera ubicua en tejidos humanos, con niveles particularmente altos en el páncreas, consistente con su papel central en la proteostasis del RE.
• Las isoformas empalmadas alternativamente y los polimorfismos de ERN1 pueden ajustar finamente la intensidad de la señalización de la UPR y contribuir a las decisiones del destino celular entre adaptación y apoptosis.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno utilizado para este anticuerpo es una proteína de fusión recombinante que abarca los aminoácidos 286–435 de IRE1 humano (NP_001424.3), que se encuentra dentro de las regiones yuxtamembrana y del dominio quinasa. Esta región está conservada entre humanos, ratones y ratas, lo que respalda la reactividad cruzada reportada.
• Para aplicaciones de Western blot, considere usar inductores de estrés del RE (por ejemplo, tunicamicina, tapsigargina) para mejorar la detección de IRE1, y valide el anticuerpo en el sistema de muestra relevante con controles de carga apropiados.
• En ELISA, optimice las condiciones de recubrimiento y detección ya que el anticuerpo reconoce un epítopo lineal dentro de la secuencia del inmunógeno.
• El peso molecular predicho es de ~110 kDa, pero las modificaciones postraduccionales y la fosforilación inducida por activación pueden causar ligeros cambios en la movilidad; confirme con marcadores de peso molecular.

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