Anticuerpo policlonal anti-KAP1/TRIM28 para WB, IP, IF/ICC, IHC-P y ELISA - Q13263

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de KAP1/TRIM28

• También conocida como factor intermediario de la transcripción 1-beta (TIF1-beta), proteína 1 asociada a KRAB (KAP-1) o KRIP-1, esta proteína de 88,6 kDa de la familia de motivos tripartitos (TRIM) presenta regiones RING, B-box, de hélice superenrollada, PHD y bromodominio.
• Funciona como una ligasa E3 de SUMO y ubiquitina que actúa como andamiaje para complejos represores de la transcripción mediante el reclutamiento de SETDB1 (metiltransferasa de histonas) y del complejo NuRD (remodelado y desacetilación de nucleosomas), lo que conduce a la metilación de H3K9 y a la formación de heterocromatina.
• Actúa como correpresor nuclear de las proteínas de dedos de zinc que contienen el dominio KRAB (KRAB-ZFP), mediando el silenciamiento de retrovirus endógenos y de genes fundamentales para el desarrollo embrionario y la impronta genómica.
• En las células T reguladoras, coopera con la isoforma 2 de ZFP90 para potenciar la actividad represora de la transcripción de FOXP3, esencial para la función supresora de las células T reguladoras. Referencias relacionadas: PMID:23543754
• Mantiene un estado represor de la transcripción en células madre embrionarias (ESC) indiferenciadas, preservando la pluripotencia y el potencial de desarrollo temprano. Referencias relacionadas: PMID:24623306
• Actúa como regulador positivo de la señalización del interferón de tipo I (IFN-I) al mediar la ubiquitinación de TBK1 ligada a Lys-63, facilitando la formación del complejo TBK1-IRF3. Referencias relacionadas: PMID:38495890
• Regula la inmunidad innata y la inflamación mediante la SUMOilación de mediadores clave: la SUMOilación de TRAF6 controla la movilización nucleo-citoplasmática y la activación de NF-kappa-B, mientras que la SUMOilación de NLRP3 estabiliza el inflamasoma y potencia su activación. Referencias relacionadas: PMID:39920527, PMID:34373456
• Se localiza predominantemente en el núcleo y se expresa ampliamente en los tejidos humanos, incluidos el bazo, el timo, la próstata, los testículos, los ovarios, el intestino delgado, el colon y los leucocitos de sangre periférica.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca la región C-terminal (aa 576-835), que contiene el PHD y el bromodominio; el anticuerpo policlonal resultante puede reconocer KAP1/TRIM28 de longitud completa y posibles variantes de corte y empalme o formas modificadas postraduccionalmente.
• Para el Western blot, se espera una banda de aproximadamente 89 kDa (88,6 kDa previstos); considere utilizar SDS-PAGE al 8–10 % para una resolución óptima y valide el anticuerpo en lisados de células humanas, de ratón o de rata.
• En los ensayos de inmunoprecipitación, optimice la concentración del anticuerpo y las condiciones del tampón de lisis; la reticulación del anticuerpo a las perlas puede mejorar la captura y reducir la interferencia de las cadenas pesadas y ligeras.
• Para inmunofluorescencia/ICC, se espera tinción nuclear; utilice una fijación adecuada (por ejemplo, PFA al 4 %) y permeabilización (por ejemplo, Triton X-100 al 0,1 %) e incluya contratinción con DAPI.
• Al realizar inmunohistoquímica (IHC-P), la recuperación antigénica en tampón de citrato (pH 6,0) suele ser beneficiosa; incluya siempre controles tisulares positivos y negativos para confirmar la especificidad.
• Para aplicaciones de ELISA, en combinación con un anticuerpo de detección, determine empíricamente la concentración óptima del antígeno de recubrimiento y las diluciones del anticuerpo utilizando muestras positivas y negativas conocidas.

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