Anticuerpo policlonal de conejo anti-LRRK2 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q5S007

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de LRRK2

• LRRK2 es una serina/treonina-proteína cinasa multidominio de gran tamaño que fosforila una amplia variedad de sustratos, desempeñando funciones críticas en la plasticidad neuronal, la inmunidad innata, la autofagia y el transporte vesicular. Referencias relacionadas: PMID:17114044 PMID:20949042 PMID:21850687

• Actúa como un regulador clave de las GTPasas RAB, controlando su intercambio de GTP/GDP y sus interacciones proteicas mediante la fosforilación de múltiples RAB, incluidos RAB3A-D, RAB5A-C, RAB8A/B, RAB10, RAB12, RAB29, RAB35 y RAB43. Referencias relacionadas: PMID:23395371 PMID:26824392 PMID:28720718 PMID:29125462

• LRRK2 regula la ciliogénesis primaria y la señalización de sonic hedgehog (SHH) en el cerebro mediante la fosforilación de RAB8A y RAB10 y, junto con RAB29, media el transporte retrógrado dependiente de retromer entre los lisosomas y el aparato de Golgi. Referencias relacionadas: PMID:23395371 PMID:29125462 PMID:30398148

• Además de la actividad cinasa, LRRK2 posee función GTPasa a través de su dominio Roc, que regula recíprocamente la actividad cinasa, y es reclutada por RAB29 a lisosomas sobrecargados para promover la liberación del contenido lisosomal y suprimir su aumento de tamaño mediante los efectores EHBP1/EHBP1L1. Referencias relacionadas: PMID:18230735 PMID:26824392 PMID:28720718 PMID:30209220 PMID:38227290

• LRRK2 regula positivamente la autofagia mediante una vía CaMKK/AMPK dependiente del calcio, que implica la activación del receptor de NAADP, el aumento del pH lisosomal y la liberación de calcio. Referencias relacionadas: PMID:22012985

• Modula la inmunidad innata potenciando la activación de RIPK2 aguas abajo de NOD1/NOD2 y, de manera independiente de la actividad cinasa, inhibe la degradación proteasómica de MAPT (tau), promoviendo su oligomerización y secreción. Referencias relacionadas: PMID:27830463 PMID:26014385

• LRRK2 se localiza en múltiples compartimentos subcelulares, incluidas las vesículas citoplasmáticas, el aparato de Golgi, el retículo endoplásmico, las mitocondrias, los endosomas, los lisosomas y las vesículas sinápticas; se expresa ampliamente en el cerebro, el corazón, el hígado y otros tejidos.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 750–910 de LRRK2 humano, una región situada en el extremo N-terminal del dominio de repeticiones ricas en leucina; el anticuerpo policlonal resultante puede reconocer múltiples epítopos y podría ser adecuado para detectar diversas isoformas o productos de escisión.
• Para el Western blot, tenga en cuenta el alto peso molecular de LRRK2 (~286 kDa); utilice un gel de poliacrilamida de bajo porcentaje (por ejemplo, 6–8 %) y optimice las condiciones de transferencia (por ejemplo, una transferencia húmeda prolongada) para garantizar una transferencia eficiente.
• En inmunohistoquímica (IHC-P), los métodos de recuperación antigénica (inducida por calor o enzimática) pueden mejorar la detección; valide el anticuerpo en su tejido específico y bajo sus condiciones de fijación.
• La inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC) puede requerir permeabilización y una fijación cuidadosa para preservar la accesibilidad de los epítopos; la tinción conjunta con marcadores de orgánulos puede ayudar a confirmar los patrones de localización.
• ELISA: el anticuerpo puede utilizarse como reactivo de captura o de detección; considere combinarlo con un clon de anticuerpo LRRK2 validado para desarrollar un ELISA tipo sándwich.

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