Anticuerpo policlonal anti-MAD2/MAD2L1 para IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q13257

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de MAD2/MAD2L1

• MAD2L1 codifica la proteína MAD2A del punto de control del ensamblaje del huso mitótico (también conocida como proteína 1 similar a MAD2), un regulador crítico de la fidelidad de la segregación cromosómica.
• MAD2L1 es un componente central del complejo del punto de control mitótico (MCC), que inhibe el complejo promotor de la anafase/ciclosoma (APC/C) para retrasar la segregación cromosómica hasta que todos los cromosomas estén correctamente unidos al huso mitótico. Referencias relacionadas: PMID:10700282 PMID:11804586 PMID:15024386
• El MCC, compuesto por CDC20, MAD2L1/MAD2, BUB1B/BUBR1 y BUB3, actúa como el efector principal del punto de control del ensamblaje del huso. Referencias relacionadas: PMID:15020684 PMID:27509861
• El APC/C unido al MCC permanece inactivo, impidiendo la transición de metafase a anafase; el silenciamiento del punto de control desencadena la auto-ubiquitinación de CDC20 mediada por UBCH10, lo que conduce a la reactivación del APC/C. Referencias relacionadas: PMID:27509861
• MAD2L1 experimenta un cambio conformacional dinámico: el confórmero cerrado (C-MAD2) forma un complejo con MAD1L1 en los cinetocoros no unidos, reclutando MAD2 abierto (O-MAD2) y catalizando su conversión a C-MAD2, amplificando así la señalización del punto de control. Referencias relacionadas: PMID:29162720
• A nivel subcelular, MAD2L1 se localiza en el núcleo, los cinetocoros de los centrómeros, los polos del huso y el citoplasma, lo que refleja sus múltiples funciones mitóticas.
• La proteína está sujeta a acetilación y fosforilación, y el corte y empalme alternativo genera múltiples isoformas; estas modificaciones y variantes pueden modular la actividad del punto de control y las interacciones proteicas.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los 205 aminoácidos N-terminales de MAD2L1 humano; considere verificar la especificidad de la isoforma y de la especie en su sistema de ensayo particular, ya que puede producirse reactividad cruzada con proteínas estrechamente relacionadas.
• En inmunohistoquímica (IHC-P), los métodos de recuperación antigénica y las condiciones de fijación pueden influir en la tinción; se recomienda la optimización utilizando controles positivos adecuados (p. ej., tejidos mitóticos) y controles negativos.
• En inmunofluorescencia (IF/ICC), se espera un marcaje de los cinetocoros y los polos del huso durante la mitosis; la tinción conjunta con marcadores de centrómeros o tubulina puede ayudar a confirmar la unión al objetivo.
• Para ELISA, la proteína MAD2L1 recombinante purificada puede utilizarse como control positivo; se recomienda titular las concentraciones de anticuerpo y antígeno para establecer relaciones óptimas entre señal y ruido.
• Valide siempre el anticuerpo en sus muestras específicas y en el contexto de su aplicación, ya que el rendimiento puede variar según los tipos celulares y las condiciones experimentales.

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