Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-MAD2/MAD2L1 para WB, ELISA - Q13257

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Proteína del Punto de Control de Ensamblaje del Huso Mitótico MAD2A

• MAD2L1 (MAD2A) es un componente crucial del complejo del punto de control mitótico (MCC), que inhibe el complejo promotor de la anafase/ciclosoma (APC/C) para retrasar la segregación cromosómica hasta que todos los cromosomas se unan correctamente al huso mitótico.
  Referencias relacionadas:
  PMID:10700282
  PMID:11804586
  PMID:15024386
• El MCC está compuesto por CDC20, MAD2L1, BUB1B/BUBR1 y BUB3; su unión a APC/C mantiene el complejo en un estado inactivo, evitando el inicio prematuro de la anafase.
  Referencias relacionadas:
  PMID:15020684
  PMID:27509861
• Tras el silenciamiento del punto de control de ensamblaje del huso, el complejo MCC-APC/C recluta la enzima E2 UBCH10, lo que conduce a la auto-ubiquitinación y degradación de CDC20. Esto reactiva APC/C, impulsando la transición metafase/anafase.
  Referencias relacionadas:
  PMID:27509861
• MAD2L1 adopta dos conformaciones distintas: abierta (O-MAD2) y cerrada (C-MAD2). La forma cerrada se ensambla con MAD1L1 en los cinetocoros no adheridos para crear una plantilla que cataliza la conversión de O-MAD2 a C-MAD2, amplificando la señal del punto de control.
  Referencias relacionadas:
  PMID:29162720
• El splicing alternativo produce dos isoformas (MAD2A y MAD2B); MAD2A (codificada por MAD2L1) es la isoforma regulada mitóticamente esencial para la función del punto de control del huso.
• La proteína se localiza dinámicamente a lo largo del ciclo celular: reside en el citoplasma y el núcleo durante la interfase, se concentra en los cinetocoros y los polos del huso durante la mitosis y se relocaliza tras la activación del punto de control.
• Las modificaciones postraduccionales, incluidas la acetilación y la fosforilación, ajustan finamente la actividad y las interacciones de MAD2L1. Su peso molecular calculado por UniProt es de ~23,5 kDa, mientras que los datos del producto indican ~24 kDa.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno (aa 1-205) abarca la región N-terminal crítica para la interacción con MAD1 y el cambio conformacional. Este diseño puede permitir la detección de ambas formas O-MAD2 y C-MAD2.
• Para Western blot, espere una banda cercana a 24 kDa. Use células sincronizadas mitóticamente (por ejemplo, tratadas con nocodazol) junto con controles de interfase para confirmar la especificidad.
• Las aplicaciones de ELISA pueden aprovechar formatos directos o sándwich; considere usar la proteína recombinante MAD2L1 como estándar.
• Se predice que el anticuerpo reacciona de forma cruzada con MAD2L1 de ratón y rata basándose en la conservación de la secuencia; se recomienda la validación en lisados de tejidos o celulares apropiados.
• Para estudios funcionales, combine con protocolos de sincronización celular para enriquecer las poblaciones mitóticas y mejorar la detección de la señal.

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