Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-MAPK1/MAPK3 para WB, IF/ICC, ELISA - P28482 / P27361

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de MAPK1/MAPK3

• MAPK1 (ERK2, p42-MAPK) y MAPK3 (ERK1, p44-MAPK) son las dos quinasas de proteínas activadas por mitógenos (MAPK) prototípicas que constituyen el núcleo de la cascada de señalización MAPK/ERK conservada.
• Tras la activación, MAPK1/3 fosforilan una amplia gama de sustratos nucleares y citoplasmáticos, incluidos factores de transcripción (p. ej., ELK1, FOS), proteínas del citoesqueleto y otras quinasas, para regular el crecimiento, la proliferación, la diferenciación, la adhesión y la supervivencia celular.
• MAPK1 fosforila específicamente a GLI1 en respuesta a la señalización de smoothened, promoviendo la disociación de GLI1 de SUFU y su translocación nuclear, regulando así positivamente la vía Hedgehog. Referencias relacionadas: PMID:35831023
• En condiciones hipóxicas, MAPK1 fosforila la fosfoglicerato quinasa PGK1, dirigiéndola a las mitocondrias y suprimiendo la producción de acetil-coenzima A a partir de piruvato. Referencias relacionadas: PMID:26942675
• La quinasa se desplaza entre el citoplasma y el núcleo, localizándose en adhesiones focales, caveolas, el citoesqueleto (incluidos centrosomas y husos) y estructuras asociadas a la membrana dependiendo del contexto celular.
• La actividad quinasa de MAPK1 está estrictamente regulada por eventos de fosforilación y desfosforilación; sirve como un centro para la propagación de señales, fosforilando ella misma a quinasas aguas abajo como RSK, MSK, MNK y quinasas MAPKAP.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la fosforilación activadora en los residuos Thr y Tyr en el bucle de activación, acetilación y ubiquitinación, que modulan su estabilidad, localización y socios de interacción.
• La eliminación o la expresión y señalización aberrante de MAPK1/3 están implicadas en cáncer, trastornos neurológicos y otras enfermedades; la quinasa es el objetivo de interacciones huésped-virus.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Este anticuerpo policlonal de conejo se generó contra un péptido sintético correspondiente a los aminoácidos 200-300 de MAPK1 y MAPK3 humano (ERK2 y ERK1); se predice que reconoce ambas quinasas y puede detectar múltiples bandas en western blot debido a isoformas y formas fosforiladas.
• Para western blot, cargue 20-30 µg de lisado proteico total y utilice controles apropiados (p. ej., células privadas de suero frente a células estimuladas con factor de crecimiento) para observar la activación de ERK. Los pesos moleculares esperados oscilan entre 36 y 43 kDa.
• En inmunofluorescencia/ICC, fije las células con paraformaldehído al 4% y permeabilice con Tritón X-100 al 0.1%; se recomienda la incubación con el anticuerpo primario durante la noche a 4°C. Valide la especificidad de la tinción con bloqueo con péptido o silenciamiento con siRNA.
• Para ELISA, este anticuerpo policlonal puede usarse como reactivo de captura o detección; las condiciones óptimas de recubrimiento y detección deben determinarse empíricamente. Un par de anticuerpos monoclonales emparejados puede mejorar la sensibilidad y la especificidad.
• El anticuerpo presenta reactividad cruzada con MAPK1/MAPK3 de ratón y rata; sin embargo, realice una validación específica de especie en su sistema experimental para confirmar la reactividad y la relación señal/ruido.

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