Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-MDA5 para WB, ELISA - Q9BYX4

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de MDA5

• MDA5 (IFIH1), también conocido como Helicard, RLR-2 o proteína 5 asociada a la diferenciación de melanomas, es un miembro de la familia de receptores similares a RIG-I (RLR) de helicasas de ARN con caja DExD/H citoplasmáticas.
• Sirve como sensor inmune innato de ácidos nucleicos virales y desempeña un papel fundamental en la iniciación de respuestas antivirales, incluida la inducción de interferones de tipo I y citoquinas proinflamatorias (PubMed:28594402, PubMed:32169843, PubMed:33727702). Referencias relacionadas: PMID:28594402 PMID:32169843 PMID:33727702
• MDA5 reconoce ARN de doble hebra largo (>1 kb de longitud) y ARNm que carece de 2'-O-metilación en su casquete 5' como patrones moleculares asociados a patógenos (PubMed:22160685). Referencias relacionadas: PMID:22160685
• Tras la unión del ligando, MDA5 se asocia con la proteína de señalización antiviral mitocondrial MAVS, desencadenando la activación de las quinasas TBK1/IKBKE y la fosforilación de IRF3/IRF7 para impulsar la transcripción de genes de interferón.
• Este receptor detecta un amplio espectro de virus, incluidos picornavirus como el EMCV y el rinovirus, flavivirus como el dengue y el virus del Nilo Occidental, reovirus, virus de la vaccinia y el coronavirus SARS-CoV-2 (PubMed:28606988, PubMed:33440148, PubMed:33514628). Referencias relacionadas: PMID:28606988 PMID:33440148 PMID:33514628
• A nivel subcelular, MDA5 se encuentra en el citoplasma, el núcleo y las mitocondrias.
• Se expresa ampliamente a niveles bajos, con una abundancia relativamente mayor en la placenta, el páncreas y el bazo, y apenas es detectable en el cerebro, los testículos y el pulmón.
• MDA5 es una fosfoproteína y contiene dominios CARD, un dominio de helicasa con caja DExD/H dependiente de ATP y un dominio C-terminal; está sujeta a ubiquitinación reguladora.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno utilizado para generar este anticuerpo abarca los aminoácidos 277–490 del IFIH1 humano; puede detectar la proteína de longitud completa (~117 kDa) así como posibles isoformas más cortas o productos de escisión.
• Para la transferencia Western (Western blotting), considere el uso de lisados de células humanas estimuladas con interferón o infectadas por virus para aumentar la expresión de MDA5. Incluya controles positivos y negativos apropiados y verifique los tamaños de las bandas en relación con los pesos moleculares predichos.
• Al realizar ELISA, optimice las condiciones de recubrimiento y detección utilizando el anticuerpo en combinación con estándares de MDA5 recombinante o nativos apropiados; se debe evaluar la reactividad cruzada con otros miembros de la familia RLR.
• Como con cualquier anticuerpo policlonal, la variabilidad entre lotes puede afectar el rendimiento; recomendamos titular y validar cada nuevo lote en su sistema de ensayo específico.

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