Anticuerpo policlonal de conejo anti-MDM2 para WB y ELISA - Q00987

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de MDM2

• MDM2 es una ubiquitina-proteína ligasa E3 que media la ubiquitinación de p53/TP53, lo que conduce a su degradación proteasómica. Inhibe la detención del ciclo celular y la apoptosis mediadas por p53 y p73 al unirse directamente a sus dominios de activación transcripcional. Referencias relacionadas: PMID:29681526
• MDM2 también actúa como una ubiquitina ligasa E3 sobre sí misma y ARRB1, permite la exportación nuclear de p53, promueve la degradación independiente de ubiquitina de RB1 e inhibe la apoptosis mediada por DAXX mediante ubiquitinación y degradación.
• MDM2 ubiquitina IGF1R y SNAI1, dirigiéndolos a la degradación dependiente del proteasoma. Referencias relacionadas: PMID:12821780 PMID:15053880 PMID:15195100
• MDM2 regula negativamente la respiración mitocondrial al unirse a NDUFS1, provocando su retención citosólica, una reducción de la actividad del complejo I, un aumento de la producción de ROS y la inducción de la apoptosis. Referencias relacionadas: PMID:30879903
• La proteína se localiza en el núcleo (nucleoplasma y nucléolo) y el citoplasma, en consonancia con sus funciones en la regulación transcripcional y la señalización citoplasmática.
• MDM2 se expresa de forma ubicua, pero varias isoformas asociadas al cáncer (de Mdm2-A a Mdm2-G) se detectan en tumores y están ausentes en tejidos normales.
• Clasificado como un protooncogén, MDM2 es una fosfoproteína con un dominio de dedo de zinc tipo RING y participa en las interacciones entre el huésped y los virus, así como en la vía de conjugación de ubiquitina.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno comprende los aminoácidos 200–430 de MDM2 humano, cubriendo los dominios ácido, de dedo de zinc y de dedo RING conservados en humanos, ratones y ratas. Para la transferencia Western, considere utilizar lisados de líneas celulares cancerosas con sobreexpresión de MDM2 (por ejemplo, SJSA-1) como controles positivos, y valide la detección en tejidos de ratón y rata con anticuerpos secundarios específicos para cada especie.
• En WB se espera una banda principal de aproximadamente 55 kDa; las especies de mayor peso molecular pueden representar formas modificadas postraduccionalmente (por ejemplo, MDM2 ubiquitinada o fosforilada). La inclusión de inhibidores de fosfatasa durante la preparación de las muestras puede ayudar a preservar el peso molecular esperado.
• Para ELISA, pruebe el anticuerpo tanto en formatos de recubrimiento directo del antígeno como de tipo sándwich. Se recomienda realizar titulaciones preliminares en tablero de ajedrez para optimizar las concentraciones de trabajo del antígeno de recubrimiento y del anticuerpo.

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