Anticuerpo Policlonal Anti-Mesotelina para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - Q13421

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Mesotelina

• La mesotelina, también conocida como antígeno CAK1 o factor potenciador pre-pro-megacariocítico, está codificada por el gen MSLN y existe en múltiples isoformas por empalme alternativo.
• La proteína se sintetiza como un precursor que se escinde en una mesotelina madura unida a la membrana por un enlace GPI y un factor potenciador megacariocítico (MPF) secretado.
• Se considera que la mesotelina anclada a la membrana participa en la adhesión celular, mediando potencialmente las interacciones entre células mesoteliales y otros tipos celulares.
• El MPF, el fragmento secretado, se identificó inicialmente por su capacidad para potenciar la formación de colonias de megacariocitos in vitro.
• Subcelularmente, la mesotelina se localiza en la membrana celular mediante su anclaje GPI, así como en el aparato de Golgi durante la biosíntesis; el fragmento MPF se secreta al espacio extracelular.
• La expresión tisular es más destacada en células pulmonares y mesoteliales, con niveles más bajos en corazón, placenta y riñón; a nivel proteico, está sobreexpresada en mesoteliomas, cánceres de ovario y ciertos carcinomas de células escamosas.
• Las modificaciones postraduccionales clave incluyen glicosilación N-ligada, formación de enlaces disulfuro, fosforilación y la unión del anclaje GPI, todas contribuyendo a sus propiedades estructurales y funcionales.
• Las palabras clave de UniProt resaltan su participación en la adhesión celular, su asociación con la membrana y su relevancia patológica por la expresión aberrante en cánceres.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno se diseñó contra los aminoácidos 296–606 de la Mesotelina humana, cubriendo el dominio extracelular; esta región puede compartirse parcialmente con el fragmento MPF, lo que permite potencialmente la detección de ambas formas.
• Para Western blotting, se espera una banda alrededor de 69 kDa para el precursor de longitud completa o la forma anclada a la membrana; bandas adicionales alrededor de 30–40 kDa podrían representar el fragmento MPF desprendido.
• Al realizar IHC-P, considere la recuperación de antígeno a pH 6 o 9 y valide la especificidad de la tinción usando secciones de tejido de mesotelina o cáncer de ovario con expresión conocida alta de Mesotelina.
• Para IF-P, fije las células con paraformaldehído y permeabilice adecuadamente; confirme la localización de la señal en la membrana celular y el aparato de Golgi.
• Valide la reactividad con muestras de humano, ratón y rata usando líneas celulares positivas y negativas conocidas; por ejemplo, OVCAR-3 (cáncer de ovario humano) o AB22 (mesotelioma de ratón) como controles positivos.
• Las aplicaciones de ELISA pueden beneficiarse de probar ambos formatos de captura y detección usando proteína recombinante de Mesotelina/MPF como estándar.
• Tenga en cuenta que el anticuerpo puede detectar tanto las formas unidas a la membrana como las solubles; considere la preparación de la muestra (lisado celular vs medio de cultivo) para distinguirlas.

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