Anticuerpo monoclonal anti-MITF para WB, IHC-P, ELISA - O75030

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de MITF

• MITF (factor de transcripción asociado a la microftalmia) es un miembro de la familia de factores de transcripción con cremallera de leucina y hélice-bucle-hélice básica (bHLH-Zip), codificado por el gen MITF (también designado BHLHE32).
• Funciona como regulador maestro de la supervivencia y diferenciación de los melanocitos y de la biogénesis de los melanosomas, al unirse a las secuencias de ADN M-box (5'-TCATGTG-3') y E-box (5'-CACGTG-3') en los promotores de genes relacionados con la pigmentación, como TYR y TYRP1 (PubMed:10587587, PubMed:22647378, PubMed:27889061). Referencias relacionadas: PMID:10587587 PMID:22647378 PMID:27889061
• Participa en la respuesta celular a la disponibilidad de aminoácidos a través de la vía de señalización MTOR: en condiciones de abundancia de nutrientes, MTOR fosforila MITF, lo que conduce a su inactivación; por el contrario, la inanición o el estrés lisosomal inhiben MTOR, promoviendo la desfosforilación y activación transcripcional de MITF (PubMed:36608670). Referencias relacionadas: PMID:36608670
• Se localiza predominantemente en el núcleo, pero también se detecta en el citoplasma y en las membranas lisosomales, lo que refleja sus funciones transcripcionales y de señalización.
• Se expresa en melanocitos, epitelio pigmentario de la retina, cerebro, placenta y riñón, siendo la expresión en melanocitos fundamental para la pigmentación y los trastornos relacionados.
• Múltiples isoformas producidas mediante corte y empalme alternativo afectan la distribución tisular y la especificidad funcional; las mutaciones en MITF están asociadas con el síndrome de Waardenburg tipo 2A, el síndrome de Tietz y el síndrome COMMAD.
• Está ampliamente regulado por modificaciones postraduccionales, incluidas la fosforilación y la ubiquitinación, que modulan su estabilidad, afinidad de unión al ADN y actividad transcripcional.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 402-526 del MITF humano (NP_001341533.1), una región que incluye el motivo de dimerización de la cremallera de leucina; considere verificar la reactividad de las isoformas y la accesibilidad del epítopo en su sistema experimental.
• Para el Western blot (WB), MITF tiene un peso molecular previsto de aproximadamente 59 kDa, pero múltiples isoformas y modificaciones postraduccionales pueden producir bandas adicionales; valide utilizando controles positivos adecuados (por ejemplo, líneas celulares de melanoma pigmentado) y controles de carga.
• Para la inmunohistoquímica (IHC-P), las condiciones de recuperación antigénica y la dilución del anticuerpo deben determinarse empíricamente; los tejidos pigmentados, como la piel o el melanoma uveal, pueden utilizarse como controles positivos.
• Para ELISA, se recomiendan titulaciones preliminares en tablero de ajedrez para determinar las condiciones óptimas de recubrimiento y detección; la combinación con anticuerpos de captura validados puede mejorar la sensibilidad.
• Dado que MITF es un factor de transcripción de baja abundancia, puede ser necesario enriquecer la muestra o utilizar métodos de detección de alta sensibilidad para lograr una detección fiable en algunos tipos de muestras.

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