Anticuerpo monoclonal anti-CD4 de ratón (APC/Cyanine7) para citometría de flujo - P06332

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de CD4

• El gen Cd4 codifica la glucoproteína de superficie de las células T CD4 y produce una proteína de membrana de tipo I de paso único, con cuatro dominios extracelulares similares a inmunoglobulinas, una hélice transmembrana y una cola citoplasmática corta. La proteína de ratón, también conocida como L3T4 o Ly-4, comparte esta arquitectura y desempeña un papel central en la inmunidad adaptativa.
• CD4 actúa como correceptor de las moléculas del MHC de clase II. En las células T colaboradoras, se une al mismo complejo MHC-péptido reconocido por el receptor de células T (TCR), aumentando así la afinidad global de la interacción y facilitando la activación de las células T.
• Tras la unión al MHC, CD4 recluta la tirosina cinasa LCK de la familia Src al complejo TCR-CD3. Esto desencadena cascadas de fosforilación que conducen a la producción de linfocinas, la motilidad y adhesión de las células T, así como a la activación completa de las células T colaboradoras.
• CD4 es esencial para el desarrollo tímico de las células T colaboradoras y para la diferenciación de los monocitos en macrófagos funcionales. También participa en la activación y expresión de citocinas en macrófagos, células dendríticas y células NK, a menudo de manera independiente del TCR/LCK.
• A nivel subcelular, CD4 se localiza predominantemente en la membrana celular, donde se asocia con balsas lipídicas y experimenta modificaciones postraduccionales, incluyendo palmitoilación, glucosilación ligada a N y fosforilación. Estas modificaciones regulan su localización en la membrana y sus funciones de señalización.
• Especificidad tisular en ratón: se expresa en gran medida en las células T colaboradoras y también está presente en niveles inferiores en macrófagos, células dendríticas y células NK. Su expresión es característica del linaje de las células T colaboradoras.
• La proteína es miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas y contiene múltiples enlaces disulfuro, características que contribuyen a su estabilidad estructural y a su capacidad para interactuar con sus ligandos.

Orientación experimental y consejos técnicos

• Dado que el inmunógeno es una proteína recombinante, el anticuerpo puede reconocer un epítopo lineal; téngalo en cuenta al realizar la recuperación antigénica o transferencias Western desnaturalizantes, aunque este anticuerpo se recomienda para citometría de flujo en condiciones no desnaturalizantes.
• Para la citometría de flujo, titule el anticuerpo para determinar la concentración óptima para su población celular e incluya controles de isotipo adecuados y controles de compensación de un solo color al utilizar fluorescencia APC/Cyanine7.
• Prepare suspensiones unicelulares a partir de órganos linfoides (bazo, ganglios linfáticos, timo) o sangre periférica, y bloquee los receptores Fc para minimizar la unión inespecífica antes de la tinción.
• Valide la expresión en la cepa y el tejido de ratón pertinentes; tenga en cuenta que CD4 se expresa en gran medida en las células T colaboradoras, pero también puede detectarse en subpoblaciones de macrófagos, células dendríticas y células NK.

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