Anticuerpo monoclonal anti-Ki67 de ratón () para citometría de flujo (intracelular) - E9PVX6

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de Ki67

• Ki67, codificada por el gen Mki67, es una proteína grande marcadora de proliferación con un peso molecular de aproximadamente 351 kDa (350864 Da según UniProt) que se asocia con los cromosomas mitóticos. Actúa como repelente cromosómico durante la mitosis temprana y como atractor cromosómico durante la mitosis tardía, garantizando la correcta dispersión y agrupación de los cromosomas (PubMed:27362226). Referencias relacionadas: PMID:27362226
• Durante la mitosis temprana, Ki67 se relocaliza desde los nucléolos hasta la superficie de los cromosomas, formando estructuras extendidas similares a un cepillo. Estas estructuras proporcionan una barrera estérica y electrostática, actuando como un tensioactivo para evitar el colapso de los cromosomas y permitir su motilidad independiente (PubMed:27362226). Referencias relacionadas: PMID:27362226
• En la anafase, la desfosforilación de Ki67 y la exposición de una región básica conservada desencadenan una separación de fases líquido-líquido dependiente del ARN en la superficie de los cromosomas, promoviendo la agrupación cromosómica y facilitando el reensamblaje nuclear. Esta transición de fase convierte a Ki67 de repelente en atractor.
• Ki67 se une al ADN con preferencia por el ADN superenrollado y rico en AT, y también se une a ARN ribosómicos inmaduros durante la anafase, lo que contribuye a la separación de fases. Sin embargo, no contribuye a la estructura interna de los cromosomas mitóticos (PubMed:26949251). Referencias relacionadas: PMID:26949251
• A nivel subcelular, Ki67 se localiza en el nucléolo durante la interfase y se transloca a la superficie de los cromosomas durante la mitosis. Se expresa predominantemente en células en proliferación, actuando como un marcador fiable de la activación del ciclo celular.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen acetilación, fosforilación y ubiquitinación, que regulan sus funciones mitóticas y su localización dinámica.

Orientación experimental y consejos técnicos

• Para la citometría de flujo intracelular, utilice un método de permeabilización compatible con antígenos nucleares, como tampones a base de metanol o saponina, para garantizar el acceso del anticuerpo a Ki67 en el nucléolo y los cromosomas.
• Titule el anticuerpo entre 0,1 y 1 µg por cada 10^6 células para determinar la concentración de tinción óptima para su tipo celular y protocolo específicos.
• Incluya un control positivo, como líneas celulares de ratón en proliferación (por ejemplo, NIH/3T3, CTLL-2) o linfocitos primarios estimulados, y un control negativo (por ejemplo, un control de isotipo o células en reposo) para validar la especificidad de la tinción.
• Fije las células rápidamente para preservar la distribución de Ki67; un almacenamiento prolongado puede afectar la integridad del epítopo. Habitualmente se utiliza fijación con paraformaldehído seguida de permeabilización.
• El conjugado es compatible con la detección mediante láser rojo estándar (633–647 nm); asegúrese de utilizar los conjuntos de filtros adecuados y una compensación mínima en caso de realizar multiplexación.

CamelBio: su puente integral de abastecimiento

CamelBio es su socio especializado en el abastecimiento de materias primas para DIV, ofreciendo una cartera integral desde el concepto hasta la clínica. Este anticuerpo anti-Ki67 forma parte de nuestra gama de marcadores de proliferación celular y oncología, respaldada por nuestra capacidad para suministrar pares de anticuerpos validados, proteínas recombinantes optimizadas y reactivos auxiliares. Tanto si necesita anticuerpos monoclonales a granel como soluciones personalizadas de materias primas para el desarrollo de diagnósticos, póngase en contacto con CamelBio para obtener un soporte fiable e integral.