Anticuerpo policlonal de conejo anti-MST1/STK4 para WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q13043

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de MST1/STK4

• La serina/treonina-proteína quinasa 4 (STK4), también conocida como MST1, KRS2 y YSK3, es una quinasa proapoptótica activada por estrés codificada por el gen STK4. Es un componente clave de la vía de señalización Hippo que controla el tamaño de los órganos y suprime tumores al restringir la proliferación y promover la apoptosis.
• MST1/STK4 forma el núcleo de la cascada de quinasas Hippo junto con su proteína reguladora SAV1, fosforilando y activando a LATS1/2 en complejo con MOB1, lo que posteriormente fosforila e inactiva a los oncoproteínas YAP1 y TAZ.
• Tras la escisión por caspasas durante la apoptosis, el fragmento de quinasa activo se transloca al núcleo, donde fosforila la histona H2B en Ser-14 (H2BS14ph), provocando directamente la condensación de la cromatina y la fragmentación del ADN.
• MST1/STK4 fosforila múltiples objetivos corriente abajo, incluyendo FOXO3 (promoviendo la translocación nuclear y la muerte celular), FOXO1 (regulando la transcripción de PMAIP1), SIRT1 (inhibiendo la desacetilación de p53 para mejorar la apoptosis dependiente de p53) y PKB/AKT1 (actuando como inhibidor).
• También fosforila el receptor de andrógenos (AR) en Ser-650, suprimiendo la actividad del AR al antagonizar la formación del complejo AR-cromatina e interactuando con la señalización de AKT1.
• La localización subcelular es principalmente citoplasmática, pero la quinasa activa escindida entra en el núcleo bajo condiciones apoptóticas para ejercer sus funciones proapoptóticas.
• Aunque se expresa de forma ubicua, los niveles de proteína MST1/STK4 aumentan notablemente en el cáncer de próstata desde estados normales a malignos, lo que sugiere un papel potencial en la progresión del cáncer.
• Las características estructurales clave incluyen un dominio de serina/treonina quinasa N-terminal y un dominio regulador C-terminal con un motivo de hélice superenrollada (coiled-coil); las modificaciones postraduccionales incluyen acetilación y fosforilación, y la proteína de longitud completa tiene un peso molecular predicho de aproximadamente 56 kDa.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 303-487 dentro de la región reguladora C-terminal de MST1/STK4 humano, evitando el dominio quinasa N-terminal; por lo tanto, los anticuerpos policlonales de conejo resultantes pueden reconocer epítopos conservados entre especies con alta homología en esta región.
• Para Western blot (WB), se espera una banda cercana a los 56 kDa; sin embargo, debido a la escisión por caspasas durante la apoptosis, también se puede detectar un fragmento activo más pequeño de ~36 kDa en muestras apoptóticas; considere usar controles apropiados (por ejemplo, células tratadas con estaurosporina).
• En inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC), se puede observar localización tanto citoplasmática como nuclear dependiendo del estado apoptótico de las células; los métodos de fijación y permeabilización deben optimizarse para este objetivo.
• Para inmunoprecipitación (IP), tenga en cuenta que el anticuerpo es una preparación policlonal y puede coprecipitar socios de unión como SAV1 o MOB1; valídelo en su sistema de ensayo con los controles negativos adecuados.
• El rendimiento en ELISA puede mejorarse utilizando el anticuerpo como reactivo de recubrimiento o detección cuando se combina con un anticuerpo de captura monoclonal adecuado específico para MST1/STK4.
• Se ha reportado reactividad cruzada para humano, ratón y rata; la alineación de secuencias de la región del inmunógeno muestra una alta conservación entre estas especies, pero para otras especies, verifique la homología antes de su uso.

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