Anticuerpo monoclonal Anti-NF-kB p65/RelA para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA, ChIP - Q04206

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de NF-kB p65/RelA

• La subunidad p65 de NF-kB (también conocida como RELA, NFKB3) es un componente central del complejo del factor de transcripción NF-kappa-B, un regulador pleiotrópico presente en casi todos los tipos celulares.
• Los complejos de NF-kappa-B son homodímeros o heterodímeros formados por proteínas que contienen un dominio similar a REL; el heterodímero de RELA y NFKB1 (p50) es la forma más abundante y actúa como activador transcripcional.
• RELA/p65 desempeña un papel central en las respuestas inflamatorias e inmunitarias, así como en la diferenciación celular, proliferación, apoptosis y tumorigénesis, al unirse a los sitios kappa-B en los promotores de genes diana.
• En células no estimuladas, los dímeros de NF-kappa-B permanecen retenidos en el citoplasma por inhibidores (I-kappa-B); tras la activación, I-kappa-B se fosforila y degrada, lo que permite que RELA se translocado al núcleo para regular la expresión génica.
• RELA está sujeto a extensas modificaciones postraduccionales, que incluyen acetilación, fosforilación, metilación, S-nitrosilación y ubiquitinación, que ajustan su actividad, estabilidad e interacciones.
• RELA es esencial para la expresión de genes de citocinas en linfocitos T, como han demostrado estudios funcionales. Referencias relacionadas: PMID:15790681
• RELA ha sido identificado como un factor de transcripción clave que regula la respuesta interferón durante la infección por SARS-CoV-2. Referencias relacionadas: PMID:33440148
• La proteína se localiza principalmente en el núcleo y el citoplasma, con un trasporte dinámico entre estos compartimentos dependiente del estado de activación.

Guía experimental y consejos técnicos

• Para Western blot (WB), se espera una banda específica alrededor de 60 kDa, coherente con el peso molecular calculado de NF-kB p65.
• Para IHC-P y IF/ICC, se recomienda la validación en el tejido o sistema celular correspondiente; puede ser necesaria la recuperación de antígeno en secciones embebidas en parafina.
• Los datos de validación por KO indican especificidad para la RELA endógena; se recomienda a los usuarios incluir controles adecuados (por ejemplo, lisados de células knockout) en sus experimentos.
• En ensayos de ChIP, el anticuerpo reconoce el NF-kB p65 nativo unido a la cromatina; las condiciones óptimas de fijación y fragmentación deben determinarse empíricamente.
• Aunque el anticuerpo está listado para múltiples aplicaciones, las condiciones individuales del ensayo (por ejemplo, dilución, tiempo de incubación) deben optimizarse en el laboratorio del usuario final.

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