Anticuerpo monoclonal anti-NF-kB p65/RelA validado en KO para WB, IF/ICC, IP, ELISA, ChIP - Q04206

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de NF-kB p65/RelA

• NF-kB p65/RelA es una subunidad del complejo del factor de transcripción NF-kB, que existe como homodímero o heterodímero; el heterodímero con NFKB1 es la forma más abundante y actúa como activador transcripcional.
• Desempeña un papel central en la inflamación, la inmunidad, la diferenciación, el crecimiento celular, la tumorigénesis y la apoptosis mediante la regulación de la expresión de genes diana.
• La activación de NF-kB implica la fosforilación y degradación de los inhibidores I-kB, lo que conduce a la liberación y translocación nuclear del complejo activo de p65/RelA.
• Es esencial para la expresión de genes de citoquinas en linfocitos T. Referencias relacionadas: PMID:15790681
• Factor de transcripción clave que regula la respuesta interferón durante la infección por SARS-CoV-2. Referencias relacionadas: PMID:33440148
• Se asocia a la cromatina en las regiones promotoras de NF-kB mediante interacción con DDX1, modulando la accesibilidad del promotor.
• Está sujeto a múltiples modificaciones postraduccionales que incluyen acetilación, fosforilación, metilación y ubiquitinación, que ajustan finamente su actividad.
• Predominantemente citoplasmático en células en reposo, se transloca al núcleo tras la activación; también se encuentra en el núcleo en condiciones basales.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a un péptido sintético de la región C-terminal (aa 450-551) de NF-kB p65 humano. Para aplicaciones como WB, se espera una banda alrededor de 58-60 kDa; se recomienda utilizar controles de carga adecuados y validar la señal en líneas celulares KO.
• Este anticuerpo es adecuado para múltiples aplicaciones; para IF/ICC, se pueden observar señales tanto nucleares como citoplasmáticas dependiendo del estado de activación de NF-kB. Incluya muestras no tratadas y estimuladas para comparación.
• Para ensayos de ChIP, optimice las condiciones de reticulación y sonicación para su tipo celular. El rendimiento del anticuerpo debe validarse con regiones de genes diana positivas y negativas.
• Se informa reactividad cruzada con ratón, rata y mono; verifique siempre la especificidad en su especie y tejido de interés antes de escalar los experimentos.
• Al usar este anticuerpo validado en KO, considere incluir un control negativo (por ejemplo, degradación por siRNA o lisado de KO CRISPR) para confirmar la especificidad de la banda en WB.

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