Anticuerpo Monoclonal Anti-NFKB1 para WB, IHC-P, IP, ELISA, CHIP - P19838

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de NF-kB

• NF-κB es un factor de transcripción pleiotrópico presente en casi todos los tipos de células, actuando como el punto final de cascadas de señalización desencadenadas por diversos estímulos y regulando procesos como la inflamación, la inmunidad, la diferenciación, el crecimiento celular, la tumorigénesis y la apoptosis.
• NF-κB funciona como complejos homodiméricos o heterodiméricos formados por proteínas que contienen el dominio tipo Rel, incluyendo RELA/p65, RELB, NFKB1/p105, NFKB1/p50, REL y NFKB2/p52; el heterodímero p65-p50 es la forma más abundante.
• NFKB1 codifica un precursor de 105 kDa (p105) que experimenta un procesamiento cotraduccional mediado por el proteasoma para generar la subunidad de unión al ADN activa de 50 kDa (p50). Referencias relacionadas: PMID:1423592
• La subunidad p50 se asocia con RELA/p65 para formar el heterodímero NF-κB p65-p50, que se une al sitio de consenso κB 5′-GGRNNYYCC-3′ en las regiones potenciadoras de genes de respuesta inmune y de fase aguda. Referencias relacionadas: PMID:1740106, PMID:7830764
• Mientras que los heterodímeros p65-p50 y RelB-p50 actúan como activadores transcripcionales, el homodímero p50-p50 funciona como un represor pero puede cambiar a un activador al asociarse con BCL3.
• NFKB1/p105 también sirve como molécula de retención citoplasmática para las proteínas NF-κB asociadas, manteniéndolas inactivas en el citoplasma; su degradación por el sistema ubiquitina-proteasoma libera MAP3K8 activo para propagar la señalización MAPK.
• La localización subcelular es dinámica: los complejos NF-κB residen principalmente en el citoplasma en un estado inactivo unido a los inhibidores IκB y se translocan al núcleo tras la activación.
• Las modificaciones post-traduccionales, incluyendo la fosforilación, acetilación, hidroxilación y ubiquitinación, regulan la actividad, estabilidad e interacciones de NFKB1.

Orientación Experimental y Consejos Técnicos

• Para Western blot, la fraccionamiento nuclear y citoplasmático puede ayudar a distinguir las bandas de p105 (105 kDa) y p50 (50 kDa); valide con los controles de carga apropiados.
• En IHC-P, considere optimizar la recuperación de antígenos y validar los patrones de tinción con controles positivos (por ejemplo, tejidos inmunes) y negativos conocidos para NF-κB.
• Para CHIP, verifique que el anticuerpo pueda enriquecer regiones promotoras que contengan el sitio κB; se recomiendan experimentos piloto con loci genómicos positivos (por ejemplo, TNFA) y negativos.
• Dado que el inmunógeno es un péptido sintético, se debe evaluar la reactividad cruzada con otros miembros de la familia NF-κB mediante knockdown con siRNA o competición con el péptido inmunizante.

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