Anticuerpo monoclonal de conejo anti-NLRP3 para WB, ELISA - Q96P20

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de NLRP3

• NLRP3 (proteína 3 que contiene dominios NACHT, LRR y PYD), también conocida como criopirina o CIAS1, es un componente sensor fundamental del inflamasoma NLRP3, un complejo multiproteico central para la defensa inmunitaria innata.
• Al detectar diversas señales asociadas a patógenos y daños, como ATP extracelular, nigericina, cristales de urato monosódico o amiloide-beta, NLRP3 inicia el ensamblaje del inflamasoma reclutando PYCARD/ASC y pro-caspasa-1, lo que conduce a la activación de la caspasa-1, la secreción de IL-1β/IL-18 y la muerte celular por piroptosis. Referencias relacionadas: PMID:16407889 PMID:18403674 PMID:18604214 PMID:27432880 PMID:23582325 PMID:28847925 PMID:31189953
• La activación de NLRP3 está rigurosamente controlada; requiere eflujo de K+ e implica transporte mediado por dineína al centro organizador de microtúbulos (MTOC), donde es desbloqueado por NEK7 antes de relocalizarse a membranas dispersas de la red trans-Golgi (dTGN) mediante unión a fosfatidilinositol 4-fosfato para formar el inflamasoma activo. Referencias relacionadas: PMID:36442502 PMID:39173637 PMID:30487600 PMID:34554188
• Más allá de su función canónica en el inflamasoma, NLRP3 también funciona de forma independiente en el núcleo como regulador transcripcional, promoviendo la diferenciación de células Th2 al unirse al ADN e impulsar la expresión de IL4.
• La proteína se localiza dinámicamente en múltiples compartimentos subcelulares, incluidos el citosol, las mitocondrias, el aparato de Golgi, el retículo endoplásmico y el núcleo, y puede ser secretada.
• Expresada predominantemente en macrófagos, NLRP3 también está presente en células dendríticas, células B y T, así como en epitelios escamosos estratificados y corpúsculos de Hassall del timo. Referencias relacionadas: PMID:33231615 PMID:34133077 PMID:11786556 PMID:17164409
• Modificaciones postraduccionales clave, como fosforilación, ADP-ribosilación, palmitoilación, formación de enlaces disulfuro y ubiquitinación, ajustan finamente la estabilidad, localización y actividad de NLRP3.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Para Western blot, considere usar un gel de SDS-PAGE de bajo porcentaje (por ejemplo, 8%) y optimizar las condiciones de transferencia para NLRP3 de alto peso molecular (~118 kDa). Un control positivo como lisado de macrófagos THP-1 estimulado con LPS puede ser beneficioso.
• Este anticuerpo monoclonal de conejo es adecuado para formatos ELISA estándar; al configurar su ensayo, evalúe las concentraciones de recubrimiento y combínelo con un anticuerpo de detección apropiado en su matriz de muestra específica.
• Dado que la expresión de NLRP3 puede inducirse en condiciones inflamatorias, el pretratamiento de modelos celulares con activadores de NLRP3 (por ejemplo, LPS más nigericina) puede mejorar la detección tanto en WB como en ELISA.

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