Anticuerpo monoclonal de conejo anti-NLRP3 para WB, IP y ELISA - Q96P20

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de NLRP3

• NLRP3 (proteína 3 que contiene los dominios NACHT, LRR y PYD), también conocida como criopirina, es un receptor citosólico de reconocimiento de patrones que actúa como componente sensor del inflamasoma NLRP3. Referencias relacionadas: PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:18604214
• Tras su activación por patógenos, cristales o partículas ambientales, NLRP3 se oligomeriza y recluta ASC y procaspasa-1, formando un complejo inflamasoma que promueve la activación de la caspasa-1; esto conduce a la escisión y secreción de las citocinas proinflamatorias IL-1β e IL-18, así como a la piroptosis mediada por gasdermina D. Referencias relacionadas: PMID:23582325, PMID:28847925, PMID:31189953
• El inflamasoma NLRP3 también impulsa la secreción no convencional de la alarmina HMGB1, amplificando las respuestas inflamatorias. Referencias relacionadas: PMID:22801494
• En condiciones de reposo, NLRP3 se mantiene en un estado autoinhibido unido a ADP; diversos estímulos que inducen la salida de K+ y alteraciones de la membrana desencadenan su activación conformacional. Referencias relacionadas: PMID:35114687
• Tras la activación, NLRP3 se transporta al centro organizador de microtúbulos (MTOC), donde NEK7 lo desbloquea, y posteriormente se relocaliza en vesículas dispersas de la red trans-Golgi (dTGN) al unirse al fosfatidilinositol 4-fosfato (PtdIns4P), lo que conduce al ensamblaje activo del inflamasoma. Referencias relacionadas: PMID:36442502, PMID:39173637
• Independientemente de su función en el inflamasoma, NLRP3 puede actuar como regulador de la transcripción en las células T colaboradoras tipo 2 (Th2), uniéndose al ADN y promoviendo la expresión de IL-4 para impulsar la diferenciación Th2, con implicaciones en el asma alérgica y el crecimiento tumoral.
• A nivel subcelular, NLRP3 se localiza en el citosol, las mitocondrias, el retículo endoplasmático y el aparato de Golgi, y puede secretarse; se expresa predominantemente en macrófagos, células dendríticas y barreras epiteliales, y en niveles inferiores en monocitos y osteoblastos.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 100–210 cercanos al dominio PYD N-terminal de NLRP3 humano; tenga en cuenta que el anticuerpo puede reconocer un epítopo en esta región, lo que podría ser relevante al evaluar construcciones truncadas o mutantes.
• Para Western blot, valide el anticuerpo utilizando lisados de macrófagos humanos o de células mononucleares de sangre periférica, donde se sabe que NLRP3 se expresa; se espera una banda de aproximadamente 118 kDa.
• En experimentos de inmunoprecipitación, asegúrese de optimizar las condiciones de lisis para preservar la integridad del complejo NLRP3, ya que la diana interactúa con múltiples proteínas del inflamasoma.
• Para aplicaciones de ELISA, se recomienda realizar previamente titulaciones en tablero de ajedrez con NLRP3 recombinante o lisados celulares para establecer las concentraciones óptimas de recubrimiento y detección.
• Dado que la activación de NLRP3 puede implicar modificaciones postraduccionales (por ejemplo, ubiquitinación y fosforilación), considere tratar las células con estímulos adecuados (por ejemplo, LPS + nigericina) para observar cambios en los patrones de detección.

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