Anticuerpo Policlonal Anti-Notch1 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P46531

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de Notch1

• Notch1 (proteína homóloga al locus neurogénico notch 1) es una proteína transmembrana de paso único tipo I, también conocida como proteína notch asociada a translocación TAN-1, codificada por el gen NOTCH1 en humanos.
• Funciona como receptor para los ligandos unidos a membrana Jagged-1 (JAG1), Jagged-2 (JAG2) y Delta-1 (DLL1), desempeñando un papel central en la determinación del destino celular, diferenciación, proliferación y apoptosis.
• Tras la activación del ligando, el dominio intracelular de notch (NICD) se libera y forma un complejo activador transcripcional con RBPJ/RBPSUH para regular genes diana posteriores, incluidos los del locus potenciador de la división.
• Participa en múltiples procesos del desarrollo: angiogénesis (regulando negativamente la proliferación y migración de células endoteliales), maduración tímica de células CD4+ y CD8+, diferenciación folicular, desarrollo cerebeloso a través de DNER y determinación de la simetría izquierda/derecha mediante el equilibrio de cilios en el organizador izquierda-derecha.
• Reprime la diferenciación neuronal y miogénica; puede potenciar la función de HIF1A secuestrando a HIF1AN; necesario para la astrogénesis protectora mediada por THBS4 tras una lesión.
• La localización subcelular incluye la membrana celular, la membrana del endosoma tardío y el núcleo, acorde con sus funciones de señalización y transcripción.
• Se expresa en bazo fetal, tronco encefálico y pulmón; en adultos, se encuentra predominantemente en tejidos linfoides.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen glicosilación, formación de enlaces disulfuro, hidroxilación y fosforilación; la proteína está sujeta a procesamiento proteolítico y ubiquitinación.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 2456-2555 de Notch1 humano (NP_060087.3), ubicados en el dominio citoplasmático. Esta región se conserva en humano, ratón y rata, lo que respalda la reactividad cruzada reportada.
• Para Western blot, se recomienda un estándar de alto peso molecular y un gel de poliacrilamida de bajo porcentaje (p. ej., 6–8%) debido al gran tamaño de la proteína (273 kDa). Pueden ser necesarios tiempos de transferencia prolongados para una transferencia eficiente a la membrana.
• Valide el anticuerpo en un sistema de muestra adecuado, como HeLa, Jurkat u otras líneas celulares conocidas por expresar Notch1. Un tejido de control positivo como bazo o tronco encefálico puede ser apropiado para IHC-P.
• Para inmunohistoquímica (parafina), se puede considerar la recuperación antigénica usando tampón de citrato mediado por calor (pH 6.0) o tampón EDTA (pH 9.0), aunque las condiciones óptimas deben determinarse experimentalmente.
• En IF/ICC, se sugiere la permeabilización con Tritón X-100 o saponina para detectar epítopos intracelulares, ya que el inmunógeno se encuentra dentro de la cola citoplasmática.
• Notch1 sufre procesamiento proteolítico; pueden observarse múltiples bandas en WB. Se pueden detectar el precursor de longitud completa (~300 kDa) y las formas transmembrana/citoplasmáticas procesadas (~120 kDa y ~110 kDa), dependiendo del tipo celular y el estado de activación.

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