Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-NPAS2 para WB, IF/ICC, ELISA - Q99743

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de NPAS2

• NPAS2 (proteína que contiene dominio PAS neuronal 2), también conocida como MOP4, bHLHe9 o PASD4, es un factor de transcripción básico-hélice-lazo-hélice-PAS que forma un componente central del reloj circadiano. Funciona como un activador transcripcional en la rama positiva del bucle de retroalimentación del reloj molecular.
• La proteína forma heterodímeros con BMAL1 (o BMAL2) y se une a elementos E-box (5'-CACGTG-3') en los promotores de genes controlados por el reloj, impulsando la transcripción rítmica de represores centrales del reloj (PER1/2/3, CRY1/2) y objetivos descendentes involucrados en el metabolismo, el sueño y otros procesos fisiológicos.
• NPAS2 desempeña un papel crítico en el mantenimiento de los comportamientos circadianos bajo condiciones normales de luz/oscuridad y alimentación, y en la sincronización del comportamiento de alimentación con la disponibilidad programada de alimentos. También contribuye a la homeostasis del sueño y a la regulación de comportamientos similares a la ansiedad mediante la modulación diurna de la expresión del receptor GABARA1 en el cerebro.
• Más allá del reloj central, NPAS2 regula la transcripción génica en tejidos periféricos como el hígado, controlando vías metabólicas clave. También participa en la respuesta al daño del ADN regulando genes del ciclo celular y de reparación del ADN.
• El heterodímero NPAS2-BMAL1 participa en un bucle de retroalimentación secundario al activar los receptores nucleares NR1D1/2 y RORA/B/G, que a su vez reprimen y activan la transcripción de BMAL1, respectivamente, contribuyendo a la robustez circadiana.
• A nivel subcelular, NPAS2 se localiza en el núcleo, lo cual es consistente con su función como factor de transcripción. Contiene dominios PAS de unión a hemo, y la unión a hemo puede influir en su actividad.
• Las modificaciones postraduccionales y las interacciones proteicas son clave para determinar la periodicidad circadiana, y las alteraciones en los ritmos mediados por NPAS2 están implicadas en enfermedades cardiovasculares, cáncer, síndromes metabólicos y envejecimiento.
• La proteína se expresa de manera ubicua, con roles prominentes en el núcleo supraquiasmático (SCN) del cerebro (el reloj central) y en osciladores periféricos.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno para este anticuerpo policlonal de conejo corresponde a una secuencia dentro de los aminoácidos 45 – 240 del NPAS2 humano (NP_002509.2), una región que abarca parte del dominio bHLH N-terminal y el primer dominio PAS. Este diseño puede conferir reactividad a las formas nativas y desnaturalizadas.
• Para la transferencia Western (Western blotting), se espera una banda alrededor de 92 kDa. Considere el uso de condiciones reductoras y protocolos estándar de SDS-PAGE. Dado que NPAS2 experimenta un ciclo circadiano, el momento de la recolección de la muestra debe controlarse estrictamente para capturar una expresión óptima.
• Al realizar inmunofluorescencia/inmunocitoquímica, NPAS2 típicamente muestra localización nuclear. Los métodos de fijación y permeabilización deben optimizarse para objetivos nucleares, y la tinción simultánea con un marcador nuclear puede confirmar la especificidad.
• En aplicaciones de ELISA, valide el anticuerpo en el sistema de muestra relevante e incluya los controles apropiados para evaluar el fondo. Los anticuerpos policlonales pueden exhibir variabilidad entre lotes, por lo que se recomienda un seguimiento consistente de los lotes.
• Se informa reactividad cruzada con NPAS2 de ratón y rata; sin embargo, se aconseja la alineación de secuencias de la región del inmunógeno para estimar la reactividad en otras especies. Para cada nueva especie o aplicación, la validación empírica es esencial.

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