Anticuerpo policlonal anti-OTOF para WB, ELISA - Q9HC10

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de la otoferlina

• La otoferlina (proteína 2 similar a Fer-1) es una proteína con múltiples isoformas; las isoformas 1 y 3 se expresan en el cerebro adulto, mientras que la isoforma 2 se encuentra en el feto y en el cerebro, corazón, placenta, músculo esquelético y riñón adultos.
• Funciona como un sensor clave de calcio en las sinapsis en cinta de las células ciliadas internas (IHC) cocleares, desencadenando la exocitosis de vesículas sinápticas y la liberación de neurotransmisores mediante la interacción dependiente del calcio con proteínas SNARE presinápticas.
• También es esencial para la exocitosis sináptica en las células ciliadas externas (OHC) inmaduras y puede desempeñar un papel en el reciclaje de endosomas.
• Pertenece a la familia de proteínas ferlina, caracterizadas por múltiples dominios C2 que median las interacciones dependientes del calcio con las membranas.
• Se localiza subcelularmente en la vesícula citoplasmática, la membrana de la vesícula sináptica, la membrana celular basolateral, la membrana del retículo endoplasmático, la membrana del aparato de Golgi, la membrana celular presináptica, la membrana celular y la red trans-Golgi.
• Contiene regiones transmembrana y un anclaje-señal que la fija a las membranas de las vesículas sinápticas y de la membrana plasmática presináptica.
• Está asociada con la sordera genética: las mutaciones causan pérdida auditiva autosómica recesiva no sindrómica (DFNB9) y trastorno del espectro de neuropatía auditiva.
• Las modificaciones postraduccionales y las características estructurales incluyen unión a metales, regiones de hélice superenrollada y múltiples dominios C2 para la unión al calcio, fundamentales para la función sináptica.

Orientación experimental y consejos técnicos

• Para WB, debido al gran tamaño de la proteína (~227 kDa), utilice geles de SDS-PAGE de bajo porcentaje y tiempos de transferencia prolongados; verifique el resultado en lisados de tejidos humanos apropiados, como cerebro o tejido coclear.
• Para ELISA, la región del inmunógeno (N-terminal 1-300) puede utilizarse para capturar o detectar la otoferlina; considere combinarlo con otro anticuerpo dirigido a un epítopo distinto para un ELISA tipo sándwich.
• Valide la especificidad del anticuerpo en el sistema de muestras pertinente, ya que la expresión de la otoferlina es específica de cada tejido y las isoformas varían; los lisados de cerebro humano o las líneas celulares transfectadas son controles positivos adecuados.
• Dado que la otoferlina es una proteína de las vesículas sinápticas, el fraccionamiento subcelular puede enriquecer la señal en las fracciones de membrana.

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