Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-P4HA2 para WB, IF/ICC, ELISA - O15460

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de P4HA2

• La subunidad alfa-2 de la prolil 4-hidroxilasa (P4HA2) es una enzima clave en la biosíntesis del colágeno, catalizando la hidroxilación de los residuos de prolina en secuencias -Xaa-Pro-Gly- para formar 4-hidroxiprolina, lo cual es esencial para la estabilidad y función de la triple hélice del colágeno.
• P4HA2 es una de varias isoformas de la subunidad alfa que forman complejos heterotetraméricos con P4HB (subunidad beta) para constituir la prolil 4-hidroxilasa activa; el splicing alternativo genera múltiples variantes de transcripción.
• La enzima se localiza predominantemente en la luz del retículo endoplasmático, donde ocurre la modificación postraduccional de los polipéptidos de colágeno nacientes.
• Su actividad catalítica depende de los cofactores hierro (Fe²⁺), 2-oxoglutarato, oxígeno molecular y ascorbato (vitamina C), clasificándola como miembro de la familia de dioxigenasas dependientes de 2-oxoglutarato.
• El perfil de expresión tisular revela los niveles más altos en corazón, placenta, pulmón y páncreas, lo cual es consistente con tejidos ricos en colágeno de tipo I y IV.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen glicosilación de tipo N; la proteína también está anotada con dominios de unión a hierro y metales, y sus defectos se asocian con variantes de la enfermedad.
• La proteína contiene motivos de repetición tetratricopéptida (TPR), que están implicados en interacciones proteína-proteína y el ensamblaje del complejo de prolil 4-hidroxilasa.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a los residuos 239-333 del P4HA2 humano, una región que exhibe una alta conservación de secuencia entre mamíferos; considere verificar la alineación para su organismo modelo.
• Para Western blot (WB), se debe observar una banda esperada alrededor de 61 kDa; use condiciones reductoras a menos que se optimice lo contrario.
• En inmunofluorescencia/ICC, anticipe una tinción localizada en el RE; se recomienda la tinción simultánea con un marcador de RE.
• Para ELISA, estandarice el antígeno de recubrimiento y la dilución del anticuerpo en su sistema de ensayo; la reactividad cruzada sugiere utilidad para muestras humanas, de ratón y rata.
• Dado que la hidroxilación del colágeno es un proceso dinámico, considere usar la detección de P4HA2 en estudios de fibrosis, remodelación del estroma canceroso o trastornos del tejido conectivo.

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