Anticuerpo monoclonal de conejo anti-PARP1 para WB, IF, IHC, ELISA - P09874

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de PARP1

• PARP1 funciona como una poli-ADP-ribosiltransferasa, catalizando la transferencia de unidades ADP-ribosa desde NAD+ a proteínas diana. Esta actividad es central para la reparación del daño del ADN y el mantenimiento de la integridad genómica. Referencias relacionadas: PMID:17177976, PMID:18055453, PMID:18172500

• Tras el reconocimiento de roturas de cadena de ADN, PARP1 recluta HPF1 para iniciar la ADP-ribosilación de serina en histonas (por ejemplo, H2B en Ser6, H3 en Ser10), lo que conduce a la descompactación de la cromatina y al ensamblaje de complejos de reparación. Referencias relacionadas: PMID:18172500, PMID:19344625, PMID:17177976

• PARP1 participa tanto en las vías de reparación por escisión de bases (BER) como en las de reparación de roturas de doble cadena (DSBR). Coopera con TIMELESS para promover la recombinación homóloga mediante la poli-ADP-ribosilación de factores de reparación. Referencias relacionadas: PMID:26344098, PMID:30356214

• Más allá de la reparación del ADN, PARP1 regula la transcripción al unirse a nucleosomas y alterar la arquitectura de la cromatina de manera similar a la histona H1, reprimiendo así la actividad de la ARN polimerasa II. Referencias relacionadas: PMID:15607977, PMID:22464733

• PARP1 es un mediador crítico de la muerte celular programada. Su producto de escisión por caspasa-3/7 se transloca al citoplasma, portando cadenas de poli-ADP-ribosa que desencadenan apoptosis dependiente de AIFM1. Referencias relacionadas: PMID:33168626

• A nivel subcelular, PARP1 reside predominantemente en el núcleo, el nucléolo y en los cromosomas. Tras la fosforilación por PRKDC, puede translocarse al citoplasma donde modula vías inmunitarias innatas, como la vía cGAS-STING. Referencias relacionadas: PMID:35460603

• PARP1 cataliza su propia auto-poli-ADP-ribosilación, una modificación reguladora principal que controla su actividad, interacciones proteicas y reclutamiento a las lesiones del ADN. Referencias relacionadas: PMID:17396150, PMID:19764761, PMID:24906880

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno se encuentra dentro de los aminoácidos 200–300 de PARP1 humano, una región que contiene el segundo dedo de zinc y parte del dominio BRCT. Se espera que el anticuerpo monoclonal de conejo resultante reconozca un epítopo conservado en las especies reactivas listadas (humano, ratón, rata).
• Para Western blot (WB), se debe detectar una banda predominante de aproximadamente 113 kDa. Considere usar extractos nucleares como fuente de muestra y valide la especificidad mediante la eliminación de PARP1 mediada por siRNA.
• En inmunofluorescencia (IF/ICC) e inmunohistoquímica (IHC-P), anticipe patrones de tinción nuclear o cromosómica. Dado que las secciones incluidas en parafina pueden requerir recuperación antigénica, optimice protocolos de recuperación de epítopos inducida por calor basados en citrato o EDTA para su tejido.
• Se reporta el uso del anticuerpo para aplicaciones de ELISA. Para ELISA tipo sándwich, se recomienda emparejarlo con un segundo clon dirigido a un epítopo distinto; un cribado por pares interno puede identificar combinaciones óptimas de captura/detección.
• Debido a que PARP1 sufre extensas modificaciones postraduccionales y escisión, considere el contexto biológico (por ejemplo, inducción de daño en el ADN, apoptosis) al interpretar los resultados. Las formas de longitud completa y escindidas pueden coexistir dependiendo de las condiciones de tratamiento.

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