Anticuerpo Monoclonal Anti-PCK1 (PEPCK-C) para Western Blot y ELISA - P35558

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de PCK1

• PCK1 (fosfoenolpiruvato carboxiquinasa 1) es la isoforma citosólica de PEPCK y actúa como la enzima limitante de la velocidad en la gluconeogénesis. Cataliza la descarboxilación y fosforilación reversibles del oxaloacetato a fosfoenolpiruvato, equilibrando los flujos catapleróticos y anapleróticos en el ciclo del ácido cítrico. Referencias relacionadas: PMID:24863970, PMID:26971250, PMID:28216384

• Bajo condiciones de baja glucosa, PCK1 impulsa la conversión cataplerótica del oxaloacetato a fosfoenolpiruvato para la gluconeogénesis; bajo alta glucosa, promueve la conversión anaplerótica del fosfoenolpiruvato a oxaloacetato. Referencias relacionadas: PMID:30193097

• Más allá de su función metabólica, la fosforilación en Ser-90 por AKT1 convierte a PCK1 en una serina-proteína quinasa. Esta actividad de quinasa "moonlighting" (bivalente) desencadena la translocación al retículo endoplásmico, donde fosforila INSIG1/2 para liberar los factores de transcripción SREBP y activar la expresión de genes lipogénicos. Referencias relacionadas: PMID:32322062

• PCK1 contribuye a la homeostasis de las células T CD8+ de memoria suministrando fosfoenolpiruvato a las vías del glucógeno y de la fosfato de pentosa (por similitud).

• A nivel subcelular, PCK1 es predominantemente citosólica, pero tras la fosforilación mediada por AKT, se transloca al retículo endoplásmico.

• Los principales sitios de expresión tisular incluyen el hígado, el riñón y los adipocitos, lo que refleja su papel central en el metabolismo de la glucosa y los lípidos.

• Las modificaciones postraduccionales incluyen acetilación, ubiquitinación y fosforilación, y estructuralmente PCK1 se clasifica como una quinasa de unión a GTP, liasa y descarboxilasa.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno se generó contra un péptido sintético que abarca los aminoácidos 523–622 cerca del extremo C-terminal, distal al sitio de fosforilación Ser-90; considere esto al diseñar experimentos de detección específicos de fosfo o isoforma.
• Para Western blot, valide la detección en lisados de hígado/riñón humano, de ratón o de rata, ya que estos tejidos expresan altos niveles de PCK1. La inducción de la gluconeogénesis (p. ej., ayuno/tratamiento con cAMP) puede mejorar la señal.
• En ELISA, pruebe el emparejamiento de anticuerpos y la compatibilidad con formatos sándwich; la naturaleza monoclonal asegura una especificidad constante entre lotes.
• Dado el peso molecular predicho de 69 kDa, asegúrese de una resolución adecuada del gel y condiciones de transferencia; las modificaciones postraduccionales pueden desplazar la banda observada.

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