Anticuerpo policlonal de conejo anti-PCNA para WB, IHC-P, ELISA - P12004

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de PCNA

• PCNA es una abrazadera deslizante de ADN que confiere procesividad a las ADN polimerasas durante la replicación del ADN. Referencias relacionadas: PMID:35585232
• Actúa como una proteína auxiliar para la ADN polimerasa delta y épsilon, mejorando su procesividad durante la elongación de la cadena principal. Referencias relacionadas: PMID:35585232
• PCNA juega un papel crucial en la respuesta al daño del ADN (DDR) coordinando la replicación del ADN con las vías de reparación, sirviendo como una plataforma de carga para proteínas DDR. Referencias relacionadas: PMID:24939902
• Las modificaciones postraduccionales de PCNA, incluyendo la monoubiquitinación y la poliubiquitinación ligada a Lys-63, dictan la elección de las vías de tolerancia al daño del ADN: la monoubiquitinación recluta polimerasas de síntesis de translesión, mientras que la poliubiquitinación desencadena la reparación mediada por recombinación libre de errores. Referencias relacionadas: PMID:24695737
• PCNA estimula las actividades exonucleasa 3'-5' y 3'-fosfodiesterasa de APEX2, pero no su actividad endonucleasa AP, y requiere ser cargada en el ADN para esta función.
• Localizado predominantemente en el núcleo, PCNA es un componente clave del horquilla de replicación.
• Las mutaciones en PCNA se asocian con trastornos neurodegenerativos, sordera y enanismo.
• La proteína sufre extensas modificaciones postraduccionales, incluyendo acetilación, metilación, fosforilación y ubiquitinación, que regulan sus diversas funciones.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a una región conservada (aa 162-261) compartida entre humano, ratón y rata, consistente con la reactividad cruzada reportada. Valide la reactividad en su matriz de muestra específica si utiliza otras especies.
• Para Western blot, espere una banda a ~29 kDa; el enriquecimiento nuclear puede mejorar la intensidad de la señal. Optimice la dilución del anticuerpo primario utilizando una serie de titulación (por ejemplo, comenzando en 1:500–1:2000).
• La IHC-P puede beneficiarse de la recuperación antigénica; incluya controles positivos (tejidos proliferativos) y negativos (control isotípico) para confirmar la especificidad.
• Se puede emplear ELISA para detectar o cuantificar PCNA en lisados celulares; asegúrese de que los tampones de recubrimiento y las condiciones de bloqueo estén optimizados para su formato de ensayo.
• Considere el uso de muestras frescas o congeladas y minimice el almacenamiento prolongado o los ciclos repetidos de congelación-descongelación para preservar la integridad del epítopo.

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