Anticuerpo policlonal de conejo anti-PHD3 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9H6Z9

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: Función y localización de PHD3

• PHD3, también conocido como homólogo 3 de Egl nine, HIF-prolil hidroxilasa 3 (HIF-PH3) y proteína 3 con dominio de prolil hidroxilasa (PHD3), está codificado por el gen EGLN3 y es una prolil hidroxilasa que media la hidroxilación de residuos de prolina en proteínas diana como PKM, TELO2, ATF4, GPX4 y HIF1A (PubMed:19584355, PubMed:20978507, PubMed:21483450). Referencias relacionadas: PMID:19584355, PMID:20978507, PMID:21483450
• Como sensor celular de oxígeno, en condiciones normóxicas PHD3 cataliza la hidroxilación de residuos específicos de prolina en el factor alfa inducible por hipoxia (HIF1A y HIF2A), dirigiéndolos a la degradación proteasomal por medio del complejo von Hippel-Lindau, atenuando así la respuesta hipóxica (PubMed:11595184, PubMed:12181324). Referencias relacionadas: PMID:11595184, PMID:12181324
• PHD3 actúa como inhibidor de la ferroptosis al hidroxilar GPX4, evitando su degradación por medio de la autofagia mediada por chaperonas; este proceso es promovido por PSAT1 que proporciona el sustrato 2-oxoglutarato (PubMed:40281343). Referencias relacionadas: PMID:40281343
• También hidroxila PKM en hipoxia, limitando la glucólisis (PubMed:21483450, PubMed:21620138). Referencias relacionadas: PMID:21483450, PMID:21620138
• PHD3 es un regulador de la apoptosis: en cardiomiocitos, inhibe el efecto antiapoptótico de BCL2 al desestabilizar el complejo BAX-BCL2 (PubMed:20849813); en neuronas, tiene un efecto proapoptótico inducido por NGF al regular la actividad de CASP3 (PubMed:16098468). Referencias relacionadas: PMID:20849813, PMID:16098468
• La proteína es esencial para la regulación hipóxica de la inflamación neutrofílica (PubMed:21317538) y desempeña un papel crucial en la respuesta al daño del ADN al hidroxilar TELO2, promoviendo su interacción con ATR para la activación de la vía ATR/CHK1/p53 (PubMed:22797300). Referencias relacionadas: PMID:21317538, PMID:22797300
• PHD3 se localiza tanto en el núcleo como en el citoplasma y se expresa ampliamente a niveles bajos, con mayor expresión en el corazón adulto, pulmón, placenta y páncreas (acinos y células de los islotes), y en bazo fetal, corazón y músculo esquelético.
• Las palabras clave asociadas a PHD3 incluyen: apoptosis, citoplasma, dioxigenasa, daño del ADN, hierro, unión a metales, núcleo, oxidorreductasa, identificación proteómica, proteoma de referencia, conjugación Ubl y vitamina C.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético correspondiente a la región N-terminal (aa 1-100) de PHD3 humano, que está conservado en humano, ratón y rata (UniProt Q9H6Z9). Se espera que el anticuerpo policlonal resultante reconozca tanto PHD3 nativo como desnaturalizado, por lo que es adecuado para múltiples aplicaciones.
• Para Western blotting (WB), se espera una banda alrededor de 27 kDa. La dilución óptima del anticuerpo debe determinarse experimentalmente, ya que la variabilidad entre lotes es inherente a los anticuerpos policlonales.
• En inmunohistoquímica (IHC-P) e inmunofluorescencia (IF/ICC), considere métodos de recuperación de antígeno adecuados para secciones fijadas con formalina y embebidas en parafina. Valide la especificidad de la tinción en tejidos con expresión conocida (por ejemplo, corazón adulto, pulmón, placenta).
• Para ELISA, el anticuerpo puede usarse como reactivo de captura o detección dependiendo del formato del ensayo. Pruebe diferentes concentraciones de recubrimiento y condiciones de bloqueo para obtener la mejor relación señal-ruido.
• La reactividad cruzada con ratón y rata está respaldada por alineación de secuencias; sin embargo, se recomienda realizar una validación en el sistema de muestra correspondiente antes de usarla a gran escala.
• Debido a la naturaleza policlonal, el rendimiento puede variar entre lotes. Incluya controles positivos y negativos adecuados (por ejemplo, lisados de células con eliminación de PHD3) para confirmar la especificidad.

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