Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-Fosfo-Akt-T308 para WB, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: Función y localización de AKT (AKT1/AKT2/AKT3)

• AKT1 es una de las tres serina/treonina proteín quinasas estrechamente relacionadas (AKT1, AKT2, AKT3) que regulan procesos esenciales como el metabolismo, la proliferación, la supervivencia celular, el crecimiento y la angiogénesis. Referencias relacionadas: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136

• Como nodo central en la señalización de PI3K, AKT fosforila más de 100 sustratos downstream en residuos de serina/treonina para mediar los efectos de la insulina, los factores de crecimiento y otros estímulos. Referencias relacionadas: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:21432781

• En la homeostasis de la glucosa, AKT promueve la captación de glucosa estimulada por insulina mediante la translocación de SLC2A4/GLUT4 y la síntesis de glucógeno al inhibir GSK3A/B; también fosforila TBC1D4 para activar la unión a 14-3-3, esencial para el transporte de glucosa. Referencias relacionadas: PMID:11994271

• AKT impulsa la supervivencia celular al fosforilar e inhibir sustratos proapoptóticos como MAP3K5, BAD y los factores de transcripción FOXO, lo que conduce al secuestro citoplasmático de las proteínas FOXO y a la sobreexpresión de genes antiapoptóticos como BCL2 y MCL1 a través de CREB1. Referencias relacionadas: PMID:11154276, PMID:10358075, PMID:9829964, PMID:10926925

• AKT activa la señalización de mTORC1 al fosforilar TSC2 y otros reguladores (CASTOR1, DEPDC5), controlando así la síntesis de proteínas y el crecimiento celular. Referencias relacionadas: PMID:12150915, PMID:12172553, PMID:31548394, PMID:33594058

• A nivel subcelular, AKT se encuentra en el citoplasma, el núcleo, la membrana celular y el espacio intermembranal mitocondrial, lo que refleja sus diversas funciones.

• En humanos, AKT1 se expresa de forma ubicua, y se observan formas fosforiladas elevadas en cáncer de próstata y de mama, lo que sugiere su papel en la progresión tumoral.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético alrededor del residuo Thr308 de la Akt humana; la fosforilación en este residuo es crítica para la activación de Akt. Por lo tanto, el anticuerpo es específico para la forma fosforilada y no reconoce la Akt no fosforilada.
• Dado que Thr308 está conservado en las isoformas de AKT1, AKT2 y AKT3, se espera que el anticuerpo presente reactividad cruzada con las correspondientes formas fosforiladas en ratón y rata, como se indica en los datos de reactividad cruzada.
• Para el análisis por Western blot, utilice inhibidores de fosfatasas adecuados durante la preparación de muestras para preservar la fosforilación. Los pesos moleculares predichos de las isoformas son de ~48 a 55 kDa; confirme la especificidad de la banda con controles positivos y negativos (por ejemplo, células estimuladas con insulina frente a células no tratadas).
• Las aplicaciones de ELISA pueden ser adecuadas para capturar o detectar fosfo-Akt en lisados celulares; optimice las condiciones de recubrimiento y detección para su matriz específica.
• Dado que la fosforilación de T308 es dinámica, incluya controles experimentales adecuados para evaluar la activación de la vía de señalización (por ejemplo, tratamiento con inhibidor de PI3K).

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