Anticuerpo Monoclonal Anti-Fosfo-Chk1 (S280) para WB, ELISA - O14757

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Serina/treonina proteína quinasa Chk1

• La serina/treonina proteína quinasa Chk1 (CHEK1) es una quinasa crítica para la detención del ciclo celular mediada por puntos de control y la reparación del ADN. Una isoforma generada por splicing alternativo (isoforma 2) actúa como un represor endógeno de la isoforma 1, antagonizando su función.
• Requerido para la respuesta al daño del ADN: reconoce la secuencia de consenso del sustrato [R-X-X-S/T] y fosforila CDC25A, CDC25B y CDC25C, creando sitios de unión para 14-3-3 que inhiben estas fosfatasas y/o promueven la degradación de CDC25A, resultando en la fosforilación inhibitoria de tirosina de los complejos CDK-ciclina y la detención del ciclo celular. Referencias relacionadas: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511
• Fosforila RAD51 en Thr-309, promoviendo su liberación de BRCA2 y mejorando su asociación a la cromatina, facilitando así la reparación del ADN por recombinación homóloga. Referencias relacionadas: PMID:15665856
• Fosforila múltiples sitios C-terminales de TP53, mejorando su acetilación y activación para promover la detención del ciclo celular y suprimir la proliferación. Referencias relacionadas: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• También fosforila otros sustratos, incluyendo FANCE (reparación de entrecruzamientos de ADN), TLK1 (ensamblaje de cromatina), histona H3.1 en Thr-11 (silenciación epigenética de genes), RB1 (promoviendo la interacción con E2F), SPRTN (reclutamiento a la cromatina) y PABIR1/FAM122A (regulación del punto de control G2/M). Referencias relacionadas: PMID:17296736 PMID:12660173 PMID:12955071 PMID:17380128 PMID:31316063 PMID:33108758
• La localización subcelular incluye el núcleo, los cromosomas, el citoplasma y los centrosomas, lo cual es consistente con sus roles en la señalización de puntos de control, la reparación del ADN y la regulación del ciclo celular.
• Se expresa de forma ubicua, con los niveles más altos en el timo, los testículos, el intestino delgado y el colon.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un fosfo-péptido que rodea a la Ser280 de Chk1 humana. El anticuerpo está diseñado para reconocer específicamente la forma fosforilada. Valide la especificidad comparando las señales en muestras tratadas con fosfatasa frente a muestras sin tratar, o utilizando un péptido de bloqueo no fosforilado.
• Para Western blot, se recomienda el uso de inhibidores de fosfatasa apropiados durante la preparación de la muestra para preservar la señal de fosforilación. Se espera una banda cercana a 54 kDa para Chk1.
• En ELISA, considere el uso de un fosfo-péptido unido a placa y un control de péptido no fosforilado para confirmar la especificidad a la fosforilación.
• La fosforilación de Chk1 en Ser280 es inducida por el daño del ADN. Estimular las células con agentes dañinos del ADN (p. ej., UV, hidroxiurea) puede mejorar la detección en líneas celulares relevantes.

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