Anticuerpo policlonal de conejo Anti-Fosfo-EGFR-Y1173 para WB, ELISA - P00533

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de EGFR

• El receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) es una tirosina quinasa receptor que se une a ligandos de la familia EGF y activa múltiples cascadas de señalización, incluidos los módulos RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCγ-PKC y STAT, para regular respuestas celulares como la proliferación, migración y supervivencia. Referencias relacionadas: PMID:27153536, PMID:10805725, PMID:2790960
• Después de la unión al ligando, EGFR sufre homodimerización o heterodimerización y autofosforilación en residuos de tirosina citoplasmáticos clave, incluido Y1173, creando sitios de unión para proteínas adaptadoras como GRB2, que propagan la señalización downstream. Referencias relacionadas: PMID:12297049, PMID:15611079
• EGFR también puede fosforilar directamente sustratos como RGS16 y MUC1, y participa en la señalización de NF-kappa-B, lo que lo vincula a vías de receptores acoplados a proteínas G y a la adhesión celular. Referencias relacionadas: PMID:11602604, PMID:11483589, PMID:11116146
• La isoforma 2 de EGFR puede funcionar como antagonista de la acción del EGF y se expresa notablemente en cánceres de ovario.
• EGFR se localiza principalmente en la membrana celular, pero también en el retículo endoplásmico, el aparato de Golgi, el núcleo, los endosomas y puede ser secretado, lo que refleja su tráfico dinámico y sus funciones de señalización.
• Las modificaciones postraduccionales clave incluyen la fosforilación (en tirosina, serina, treonina), glicosilación, ubiquitinación y palmitoilación, que regulan su actividad, estabilidad y redes de interacción.
• De expresión ubicua, EGFR desempeña funciones en el desarrollo, la memoria, el aprendizaje y la señalización del dolor, y su desregulación está implicada en diversos tipos de cáncer.
• EGFR también actúa como receptor de la célula huésped para la entrada del virus de la hepatitis C (VHC), facilitando la internalización viral en los hepatocitos.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético específico para Y1173 del EGFR humano. Para Western blot, se recomienda usar tampones de lisis fosfoespecíficos e inhibidores de fosfatasas para preservar el estado de fosforilación durante la preparación de la muestra.
• Dado que EGFR se fosforila en alto grado después de la estimulación con ligando, el tratamiento de las células con EGF antes de la cosecha puede mejorar la detección de la señal en WB; por el contrario, se puede usar la deprivación de suero y/o el tratamiento con fosfatasas para verificar la fosfoespecificidad.
• Para ELISA, considere usar el anticuerpo en formato sándwich con un anticuerpo de captura de EGFR total para cuantificar los niveles de fosfo-EGFR en lisados de células o extractos de tejido.
• Se puede realizar la desorción cruzada con el péptido no fosforilado para confirmar la fosfoespecificidad tanto en WB como en ELISA.

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