Anticuerpo Monoclonal Anti-Fosfo-EGFR-Y845 para WB, IF/ICC, ELISA - P00533

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización del EGFR

• EGFR (Receptor del Factor de Crecimiento Epidérmico), también conocido como ErbB-1 o HER1, es un receptor tirosina quinasa transmembrana perteneciente a la familia ERBB. Una isoforma empalmada alternativamente (isoforma 2) puede funcionar como un antagonista de la acción del EGF.
• Como receptor tirosina quinasa, el EGFR se une a varios ligandos de la familia EGF y desencadena cascadas de señalización intracelular que convierten las señales extracelulares en respuestas celulares apropiadas, incluyendo proliferación, diferenciación y supervivencia (PubMed:10805725, PubMed:27153536, PubMed:2790960). Referencias relacionadas: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960
• Los ligandos conocidos incluyen EGF, TGFA/TGF-alfa, AREG, epigen/EPGN, BTC/betacelulina, epirregulina/EREG y HBEGF/EGF de unión a heparina (PubMed:12297049, PubMed:15611079, PubMed:17909029). Referencias relacionadas: PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029
• La unión del ligando induce la homo- y/o heterodimerización del receptor y la posterior autofosforilación en tirosinas citoplasmáticas clave. La tirosina 845 fosforilada (Y845), ubicada en el bucle de activación del dominio quinasa, es crítica para estabilizar la conformación activa y mejorar la actividad catalítica.
• La autofosforilación conduce al reclutamiento de proteínas adaptadoras como GRB2, activando múltiples módulos aguas abajo incluyendo RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC, STATs y posiblemente NF-kappa-B (PubMed:11116146, PubMed:27153536). Referencias relacionadas: PMID:11116146 PMID:27153536
• El EGFR fosforila directamente otras proteínas, como RGS16 (activando su actividad GTPasa) y MUC1 (mejorando su interacción con SRC y beta-catenina) (PubMed:11602604, PubMed:11483589). Referencias relacionadas: PMID:11602604 PMID:11483589
• Regula positivamente la migración celular a través de la interacción con CCDC88A/GIV, que retiene al EGFR en la membrana celular tras la estimulación con ligando (PubMed:20462955). Referencias relacionadas: PMID:20462955
• El EGFR se localiza principalmente en la membrana celular, pero también se encuentra en el retículo endoplásmico, aparato de Golgi, núcleo, endosomas y puede ser secretado en exosomas. Se expresa de forma ubicua, con la isoforma 2 detectada notablemente en cánceres de ovario.
• Además de sus funciones fisiológicas normales, el EGFR actúa como receptor de la célula huésped para la entrada del virus de la hepatitis C (VHC), mediando la formación del complejo correceptor CD81-CLDN1 y mejorando la fusión de membrana viral.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Dado que este anticuerpo reconoce un epítopo dependiente de fosforilación, incluya inhibidores de fosfatasas en los tampones de lisis y manipule las muestras rápidamente a bajas temperaturas para preservar la señal de fosforilación.
• Para western blot, espere una banda principal alrededor de 134 kDa. Para confirmar la especificidad de fosforilación, considere tratar los lisados celulares con fosfatasa lambda o realizar ensayos de competición con péptidos utilizando la contraparte no fosforilada del péptido inmunógeno.
• En inmunofluorescencia/ICC, se anticipa un patrón de tinción predominantemente asociado a la membrana; la co-tinción con un marcador de membrana plasmática puede ayudar a confirmar la localización.
• Para aplicaciones de ELISA, el anticuerpo puede usarse para capturar o detectar EGFR fosforilado; optimice las condiciones de recubrimiento y detección empíricamente.
• Validado para reactividad humana; para otras especies, verifique la homología de secuencia alrededor de Y845 y la reactividad cruzada experimentalmente.

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