Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Fosfo-eIF4EBP1-S65 para WB, ELISA - Q13541

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (Proteína de unión al factor de iniciación de la traducción eucariota 4E 1), también conocida como PHAS-I (proteína fosforilada estable al calor y ácido regulada por insulina 1), es un represor clave de la iniciación de la traducción dependiente de caperuza.
• En su estado hipofosforilado, 4E-BP1 compite con eIF4G por la unión a eIF4E, impidiendo así el ensamblaje del complejo eIF4F e inhibiendo la traducción. La hiperfosforilación, como en Ser65, promueve la disociación de eIF4E, permitiendo que proceda la traducción dependiente de caperuza.
• 4E-BP1 integra señales de factores de crecimiento, hormonas y nutrientes a través de las vías de la quinasa MAP y mTORC1, siendo la fosforilación mediada por mTORC1 en múltiples sitios (incluidos Thr37/46, Ser65 y Thr70) crítica para su inactivación.
• 4E-BP1 pertenece a la familia de proteínas de unión a eIF4E y comparte un motivo conservado de unión a eIF4E (YXXXXLΦ) que interactúa directamente con la superficie dorsal de eIF4E.
• La localización subcelular es principalmente citoplasmática, pero 4E-BP1 puede trasladarse al núcleo, donde puede regular la traducción nuclear u otras funciones. La dinámica de fosforilación compartimentada puede variar.
• Además de la fosforilación, 4E-BP1 sufre acetilación, ubiquitinación (formación de enlaces isopeptídicos) y otras modificaciones postraduccionales que ajustan su estabilidad y actividad, clasificándola como una fosfoproteína y un objetivo de conjugación tipo ubiquitina.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético fosforilado que rodea a Ser65, por lo que se espera que la reactividad del anticuerpo sea fosfo-específica. Para ELISA, considere preincubar el anticuerpo con un péptido no fosforilado para confirmar la fosfo-especificidad.
• En el western blot, incluya la detección de 4E-BP1 total (usando un anticuerpo pan) para monitorear tanto los niveles totales de proteína como el estado de fosforilación. Use inhibidores de fosfatasas apropiados en los tampones de lisis.
• El anticuerpo reconoce 4E-BP1 humana. Valide el rendimiento en líneas celulares humanas o muestras de tejido; no se ha reportado reactividad con otras especies, por lo que se recomienda probar la reactividad cruzada si se aplica a muestras no humanas.
• Como anticuerpo policlonal de conejo, se debe monitorear la consistencia entre lotes; se recomiendan experimentos piloto con el lote específico.

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