Anticuerpo policlonal anti-fosfo-eNOS-S1177 para WB, IHC-P, ELISA - P29474

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la eNOS

• La eNOS (óxido nítrico sintasa 3) es una enzima expresada constitutivamente que cataliza la producción de óxido nítrico (NO), una molécula de señalización crítica implicada en la relajación del músculo liso vascular a través de una vía mediada por cGMP y la angiogénesis inducida por VEGF. Referencias relacionadas: PMID:1378832
• El NO producido por la eNOS también desempeña un papel en la activación plaquetaria y la regulación de la coagulación sanguínea.
• La enzima se localiza en la membrana plasmática, las caveolas, el citoplasma, el citoesqueleto y el aparato de Golgi, lo que refleja su regulación subcelular dinámica.
• La eNOS se expresa en plaquetas, placenta, hígado y riñón.
• El empalme alternativo genera una isoforma dominante negativa que carece de actividad eNOS y puede regular a la baja la función de la eNOS al formar heterodímeros con la isoforma 1.
• Las modificaciones postraduccionales clave incluyen la fosforilación en Ser1177 (el epítopo reconocido por este anticuerpo), así como la miristoilación y palmitoilación para el anclaje a la membrana.
• La actividad de la eNOS depende de cofactores como el hemo, FAD, FMN, NADP, calmodulina y metales como el calcio y el zinc.

Guía experimental y consejos técnicos

• Para Western blotting, incluya controles adecuados (p. ej., células endoteliales estimuladas frente a no estimuladas) e inhibidores de fosfatasa para verificar la especificidad de la fosforilación y evitar la desfosforilación.
• En inmunohistoquímica (IHC-P), valide el anticuerpo en secciones incluidas en parafina utilizando recuperación de antígeno y realice una tinción paralela con un anticuerpo anti-eNOS independiente de la fosforilación para evaluar la especificidad.
• Para aplicaciones de ELISA, el anticuerpo puede utilizarse para capturar o detectar fosfo-eNOS (Ser1177) en lisados celulares o preparaciones de proteínas recombinantes; considere utilizar un anticuerpo anti-eNOS total para la normalización.
• El peso molecular predicho de la eNOS es de aproximadamente 133 kDa; utilice marcadores de peso molecular adecuados y porcentajes de gel apropiados para una resolución clara.
• Se ha reportado reactividad cruzada para humano y ratón; si utiliza otras especies, realice una alineación de secuencias para evaluar la conservación del epítopo y valide empíricamente la reactividad.

CamelBio: Su puente de abastecimiento integral

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