Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Fosfo-mTOR-S2448 para WB, IF/ICC, ELISA - P42345

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Serina/treonina-proteína quinasa mTOR

• La serina/treonina-proteína quinasa mTOR (MTOR, también conocida como FRAP/FRAP1/FRAP2/RAFT1/RAPT1) es un regulador maestro de 289 kDa del metabolismo, crecimiento y supervivencia celular que integra señales hormonales, de nutrientes y de estrés. Referencias relacionadas: PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926
• MTOR funciona como el centro catalítico de dos complejos distintos, mTORC1 y mTORC2, que difieren en composición de subunidades, regulación aguas arriba y objetivos aguas abajo. Referencias relacionadas: PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:18497260
• mTORC1 activado promueve la síntesis de proteínas al fosforilar EIF4EBP1 para aliviar su inhibición de eIF4E, y al fosforilar RPS6KB1/2 para impulsar la fosforilación de la proteína ribosomal S6 y el inicio de la traducción. Referencias relacionadas: PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926 PMID:24403073 PMID:29236692 PMID:18925875
• mTORC1 estimula la síntesis de lípidos y nucleótidos al activar SREBF1/SREBP1 y CAD, respectivamente, coordinando la producción de macromoléculas para el crecimiento celular. Referencias relacionadas: PMID:23429703 PMID:23429704 PMID:23426360
• En condiciones de suficiencia de nutrientes, mTORC1 suprime la autofagia al fosforilar reguladores clave de la autofagia, incluyendo ULK1 (Ser‑758), DAP, RUBCNL y AMBRA1. Referencias relacionadas: PMID:32561715 PMID:20537536 PMID:30704899 PMID:23524951 PMID:25438055
• El complejo mTORC2 fosforila quinasas AGC incluyendo AKT en la Ser‑473, PKC y SGK1, regulando la supervivencia celular, proliferación y reorganización del citoesqueleto de actina. Referencias relacionadas: PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:21376236 PMID:15718470 PMID:24670654
• MTOR se localiza dinámicamente en membranas lisosomales, de retículo endoplásmico, de Golgi, mitocondriales y nucleares; la activación de mTORC1 está estrechamente ligada a su reclutamiento a la superficie lisosomal.
• MTOR se expresa de forma generalizada, con niveles más altos en el testículo, y está regulado por extensas fosforilaciones, acetilaciones y ubiquitinaciones.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético que abarca la Ser‑2448; por lo tanto, el anticuerpo reconoce a mTOR solo cuando está fosforilado en este residuo. Para Western blot, trate las células con estímulos apropiados (por ejemplo, factores de crecimiento, aminoácidos) e incluya inhibidores de fosfatasas en los buffers de lisis para preservar la fosforilación.
• Para la transferencia Western de la proteína mTOR de 289 kDa, utilice un gel de poliacrilamida de bajo porcentaje (por ejemplo, 6–8%) y un tiempo de transferencia más prolongado. Verifique la eficiencia de transferencia con un marcador preteñido.
• Para inmunofluorescencia (IF/ICC), fije las células con paraformaldehído, permeabilícelas adecuadamente y utilice un buffer de bloqueo para reducir la unión no específica. Confirme la localización mediante co-tinteo con marcadores lisosomales si está estudiando la activación de mTORC1.
• Las aplicaciones de ELISA pueden implicar la recubrimiento con péptido o proteína; valide las condiciones del ensayo (buffer de recubrimiento, agente de bloqueo, dilución del anticuerpo) en su matriz específica.

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