Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA-S311 pAb de conejo para WB y ELISA - Q04206

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización del factor de transcripción p65

• NF-kappa-B es un factor de transcripción pleiotrópico presente en casi todos los tipos celulares, que funciona como punto final de múltiples cascadas de transducción de señales. Forma homodímeros o heterodímeros; el complejo heterodimérico RELA-NFKB1 es el más abundante y actúa como activador transcripcional.
• RELA (p65) se une a sitios kappa-B en los promotores de genes diana con una afinidad y especificidad distintas según el dímero, activa la transcripción directamente y también modula indirectamente la accesibilidad de la cromatina a otros factores.
• En células no estimuladas, los complejos de NF-kappa-B se mantienen inactivos en el citoplasma por los inhibidores I-kappa-B. Después de la estimulación, I-kappa-B es fosforilado por las IKK y degradado, liberando a RELA para que se transloca al núcleo e inicie la expresión génica.
• RELA está sujeto a extensas modificaciones postraduccionales —incluyendo fosforilación en múltiples sitios (por ejemplo, S311), acetilación, metilación y ubiquitinación— que regulan su actividad, estabilidad e interacciones proteicas.
• Es esencial para la expresión de genes de citoquinas en linfocitos T, lo que resalta su papel crítico en las respuestas inmunitarias adaptativas.
  Referencias relacionadas: PMID:15790681
• Identificado como un factor de transcripción clave que regula la respuesta al interferón durante la infección por SARS-CoV-2. Referencias relacionadas: PMID:33440148
• Su localización subcelular es predominantemente citoplasmática en condiciones de reposo, debido a que I-kappa-B oculta la señal de localización nuclear; la acumulación nuclear ocurre rápidamente después de la activación.
• Se anota con palabras clave que incluyen Fosfoproteína, Acetilación, Metilación, conjugación Ubl, enlace isopéptido y S-nitrosilación, lo que refleja la intrincada red regulatoria que controla este factor de transcripción maestro.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno, un fosfopéptido sintético que cubre la posición S311, está diseñado para generar anticuerpos específicos de la forma fosforilada. Verifique la fosfoespecificidad tratando los lisados con fosfatasa lambda antes del WB.
• Aplicaciones adecuadas según el proveedor: WB y ELISA. Para WB, utilice 20–30 µg de lisado de células completas y un amortiguador de bloqueo estándar; valide el tamaño de la banda alrededor de 60 kDa con controles positivos adecuados (por ejemplo, células HeLa estimuladas con TNF-α).
• Para ELISA, considere recubrir con el fosfopéptido y usar su contraparte no fosforilada como control negativo para confirmar la unión específica al sitio.
• Presenta reactividad cruzada con humano y ratón; realice una validación inicial en las líneas celulares o tejidos relevantes de estas especies. Se recomienda inducir la señalización de NF-kB con estímulos como TNF-α o PMA/ionomicina para potenciar las señales de fosforilación.
• Evite el desnudado agresivo de la membrana que pueda alterar el estado de fosforilación; en su lugar, utilice amortiguadores de pH bajo o detergentes suaves si necesita volver a sondear la membrana.

CamelBio: Su puente de abastecimiento integral

CamelBio apoya a fabricantes de diagnósticos y equipos de investigación con el abastecimiento integrado de materias primas para cada etapa de desarrollo, desde el concepto de ensayo hasta la aplicación clínica. Este anticuerpo anti-fosfo-NF-kB p65 se adapta a flujos de trabajo de investigación sobre inflamación, inmunología y biomarcadores de cáncer, y podemos complementarlo con proteínas recombinantes validadas, pares de anticuerpos emparejados y reactivos de detección auxiliares. Nuestra cartera incluye anticuerpos monoclonales y policlonales a granel, reactivos para dianas poco comunes y generación personalizada de anticuerpos específicos de fosforilación para simplificar el montaje de su kit IVD.