Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA-S536 para WB, IF/ICC, ELISA - Q04206

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización del Factor de Transcripción p65

• La subunidad p65 de NF-kappa-B (RELA) es un factor de transcripción central de la familia NF-kappa-B, que codifica una proteína de 60 kDa (también conocida como p65, NFKB3, CMCU, AIF3BL3) con roles críticos en las respuestas inmunitarias y al estrés. Entrada UniProt Q04206.
• El complejo NF-kappa-B existe como homo- o heterodímeros; el heterodímero RELA-NFKB1 (p50) es el más abundante y funciona como un activador transcripcional al unirse a motivos de ADN κB específicos en los promotores de genes.
• La activación de NF-kappa-B implica la fosforilación inducida por estímulos y la degradación de los inhibidores IκB, liberando al complejo RELA para translocarse desde el citoplasma al núcleo. La fosforilación de RELA en Ser536, ubicada en el dominio de transactivación, mejora su actividad transcripcional y es un sello distintivo de la activación canónica de NF-κB.
• La localización subcelular de RELA está estrictamente controlada: en células en reposo se encuentra predominantemente en el citoplasma unido a IκB; tras la inducción, se acumula en el núcleo para modular la expresión de genes diana. La inmunofluorescencia puede detectar la translocación nuclear como una lectura de la activación de la vía.
• RELA está fuertemente modificado por fosforilación, acetilación, metilación, S-nitrosilación y ubiquitinación, lo que afina su producción transcripcional. Es esencial para la expresión de citoquinas en células T (PubMed:15790681) y para la respuesta de interferón tipo I durante la infección por SARS-CoV-2 (PubMed:33440148). Referencias relacionadas: PMID:15790681 PMID:33440148
• El gen RELA codifica múltiples isoformas, y su actividad se modula a través de interacciones con cofactores y remodeladores de cromatina, lo que destaca capas regulatorias complejas más allá de la simple entrada nuclear.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Prepare lisados celulares o de tejidos con cócteles de inhibidores de proteasas y fosfatasas para preservar la fosforilación en Ser536. Para Western blotting, separe las proteínas por SDS-PAGE y sonda con este anticuerpo a una dilución inicial verificada por el usuario final; se espera una banda fuerte cerca de 60 kDa.
• Para inmunofluorescencia o inmunocitoquímica (IF/ICC), fije las células con paraformaldehído al 4% y permeabilice adecuadamente; utilice un tampón de bloqueo apropiado para minimizar la unión inespecífica. Investigue la translocación nuclear de NF-kB p65 bajo estímulos inflamatorios (por ejemplo, tratamiento con TNF-α) para validar la señal fosfo-específica.
• En aplicaciones de ELISA, considere usar un control de bloqueo con péptido fosforilado para confirmar la detección específica de fosforilación. Titular el anticuerpo para determinar las concentraciones óptimas en su contexto de ensayo específico.
• La dinámica de fosforilación puede variar entre tipos celulares; siempre incluya controles positivos y negativos (por ejemplo, células estimuladas vs. no estimuladas) para interpretar los resultados con precisión.

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