Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA (Ser468) para WB, IP, ELISA - Q04206

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de NF-kB p65/RelA

• El factor de transcripción p65 (RelA) es la subunidad p65 del complejo del factor de transcripción NF-kB, un factor pleiotrópico presente en casi todos los tipos celulares, y sirve como punto final para las vías de transducción de señales iniciadas por diversos estímulos relacionados con la inflamación, la inmunidad, la diferenciación, el crecimiento celular, la tumorigénesis y la apoptosis.
• La NF-kB funciona como un homodímero o heterodímero de proteínas que contienen el dominio Rel. La forma más abundante es el heterodímero RELA-NFKB1 (p65-p50). Estos dímeros se unen a sitios de ADN kappa-B con afinidades distintas, actuando los complejos RELA-NFKB1 y RELA-REL como activadores transcripcionales.
• La actividad de NF-kB se regula a través de múltiples mecanismos, incluidas las modificaciones postraduccionales, la compartimentalización subcelular y las interacciones con cofactores o correpresores. La NF-kB inactiva se retiene en el citoplasma por las proteínas inhibidoras I-kB; tras la fosforilación mediada por IKK y la degradación de I-kB, el complejo NF-kB se libera y se transloca al núcleo.
• RELA posee una afinidad intrínseca de unión al ADN débil, pero contribuye a la capacidad de unión al ADN del complejo NF-kB. También modula la accesibilidad de la cromatina en los promotores diana, influyendo indirectamente en la expresión génica.
• RELA es esencial para la expresión de genes de citocinas en las células T, desempeñando un papel fundamental en las respuestas inmunitarias adaptativas. Referencias relacionadas: PMID:15790681
• Durante la infección por SARS-CoV-2, RELA actúa como un factor de transcripción clave que regula la respuesta al interferón, lo que subraya su papel en la inmunidad innata antiviral. Referencias relacionadas: PMID:33440148
• A nivel subcelular, RELA se desplaza entre el citoplasma y el núcleo. Está sujeta a extensas modificaciones postraduccionales, incluidas acetilación, metilación, fosforilación (por ejemplo, en Ser468, objetivo de este anticuerpo), S-nitrosilación y conjugación tipo ubiquitina, que modulan su actividad, estabilidad e interacciones.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Para Western blot (WB), prepare lisados utilizando tampón RIPA suplementado con inhibidores de proteasas y fosfatasas para preservar la señal de fosforilación en Ser468. Realice SDS-PAGE y transferencia, luego sondee con el anticuerpo a una dilución determinada empíricamente.
• En experimentos de inmunoprecipitación (IP), confirme que el nivel de expresión de la proteína diana es suficiente en su lisado celular o tisular. El origen de conejo y la naturaleza monoclonal del anticuerpo pueden facilitar una captura limpia con reactivos secundarios que coincidan con la especie.
• Para la detección basada en ELISA, considere usar el anticuerpo como reactivo de captura o detección, validando la linealidad y especificidad en su sistema de ensayo con los controles fosfoespecíficos adecuados.
• Dado que el anticuerpo presenta reactividad cruzada con humano, ratón y rata, puede utilizarse para estudios comparativos entre estas especies. Sin embargo, verifique siempre el rendimiento incluyendo controles positivos y negativos para cada especie y condición de tratamiento.
• Optimice la concentración del anticuerpo para cada aplicación y tipo de muestra, ya que las diluciones recomendadas pueden variar según las condiciones experimentales y los métodos de detección.

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