Anticuerpo policlonal de conejo Anti-Phospho-NF-kB p65/RelA-T435 para WB y ELISA - Q04206

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de NF-kB p65/RelA

• Codificado por el gen RELA, NF-kB p65 (también conocido como RelA) es una subunidad del complejo del factor de transcripción NF-kB, que juega un papel central en la regulación de las respuestas inmunitarias, la inflamación, la proliferación celular y la apoptosis.
• NF-kB funciona como un homodímero o heterodímero; el heterodímero RELA-NFKB1 es la forma más abundante, y el homodímero RELA-RELA también puede activar la transcripción en promotores de genes diana específicos.
• En células no estimuladas, los dímeros de NF-kB están secuestrados en el citoplasma por proteínas inhibidoras de kB (IkB); tras la estimulación, IkB es fosforilada por IKK y degradada, permitiendo que NF-kB se trasloque al núcleo y active la expresión génica.
• RELA es esencial para la expresión de genes de citoquinas en células T, contribuyendo a las respuestas inmunitarias adaptativas. Referencias relacionadas: PMID:15790681
• Se ha identificado como un factor de transcripción clave que regula la respuesta de interferón durante la infección por SARS-CoV-2. Referencias relacionadas: PMID:33440148
• RELA está sujeto a extensas modificaciones postraduccionales, incluyendo fosforilación (por ejemplo, en Thr435), acetilación, metilación y otras, que modulan su actividad transcripcional e interacciones.
• La proteína se localiza principalmente en el citoplasma en su estado inactivo y en el núcleo tras la activación, donde se une al ADN y recluta coactivadores.
• El empalme alternativo y los reordenamientos cromosómicos que involucran a RELA se han asociado con ciertas enfermedades, destacando su importancia tanto en la fisiología normal como en la patología.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno utilizado para generar este anticuerpo es un péptido fosforilado sintético alrededor de Thr435, por lo que reconoce específicamente la forma fosforilada de p65. Para WB, asegúrese de que los lisados celulares se preparen con inhibidores de fosfatasas para preservar el estado de fosforilación.
• Al realizar ELISA, considere usar péptidos tanto fosforilados como no fosforilados para verificar la fosfo-especificidad del anticuerpo.
• Para transferencia Western, se espera una banda alrededor de 60 kDa; valide usando controles positivos conocidos por tener NF-kB activado (por ejemplo, células tratadas con TNF-alfa) y controles negativos (por ejemplo, lisados no tratados o tratados con fosfatasa).
• Se informa que el anticuerpo reacciona con muestras humanas y de ratón; la reactividad cruzada con otras especies debe evaluarse experimentalmente si es necesario.
• Optimice las diluciones del anticuerpo primario según su sistema de muestras; los puntos de partida típicos son 1:500-1:2000 para WB, pero las condiciones exactas pueden variar.

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