Anticuerpo policlonal de conejo Anti-Fosfo-NF-κB2-S866 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q00653

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de NF-κB2 p100/p52

• El gen NF-κB2 codifica la proteína precursora p100, que se procesa proteolíticamente para generar la subunidad activa p52; también se expresa la isoforma p49. p100 puede retener complejos de NF-κB en el citoplasma.
• NF-κB es un factor de transcripción pleiotrópico que regula la inflamación, la inmunidad, la diferenciación celular, el crecimiento, la tumorigénesis y la apoptosis.
• p52 forma homodímeros o heterodímeros con otros miembros de la familia NF-κB/Rel (RELA/p65, RELB, NFKB1/p50, REL) y se une a la secuencia consenso κB 5'-GGRNNYYCC-3' en los potenciadores de genes diana.
• El complejo heterodimérico RelB-p52 funciona como activador transcripcional, mientras que el homodímero p52-p52 actúa como represor.
• En la vía NF-κB no canónica, el homodímero CHUK/IKKA activado por MAP3K14 fosforila p100 asociado a RelB, desencadenando el procesamiento dependiente de ubiquitina hacia p52 y la translocación nuclear.
• NF-κB2 se localiza tanto en el citoplasma como en el núcleo, y su actividad está controlada estrechamente por la compartimentación subcelular y las modificaciones postraduccionales (fosforilación, ubiquitinación).
• p52, junto con RELB, regula el reloj circadiano al reprimir la actividad activadora transcripcional del heterodímero CLOCK-BMAL1.
• Los reordenamientos cromosómicos que involucran a NFKB2 están asociados a ciertas neoplasias linfoides.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético que incluye la Serina 866; por lo tanto, se espera que el anticuerpo reconozca específicamente a NF-κB2 solo cuando esté fosforilado en este residuo. Utilice inhibidores de fosfatasas durante la preparación de muestras para preservar la fosforilación.
• Para Western blot, el peso molecular predicho de p100 es de ~97 kDa; sin embargo, se pueden observar múltiples bandas debido a intermediarios de procesamiento o degradación. Se recomienda incluir controles positivos y negativos apropiados (por ejemplo, lisados tratados con fosfatasa).
• Para inmunohistoquímica (IHC-P) e inmunofluorescencia (IF/ICC), puede ser necesario optimizar los pasos de recuperación de antígeno, permeabilización y bloqueo. El rendimiento del anticuerpo debe validarse en el tejido o sistema celular correspondiente.
• En aplicaciones de ELISA, el anticuerpo específico para fosfo se puede emparejar con un anticuerpo de captura que reconozca NF-κB2 total para cuantificar los niveles de proteína fosforilada.
• Se reporta reactividad cruzada con ratón, pero no se ha probado la reactividad con otras especies; se aconseja una validación adicional si se utilizan muestras que no sean humanas o de ratón.

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