Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Fosfo-NFKB1-S893 para IF/ICC - P19838

Especificaciones y Parámetros Centrales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de NFKB1

• NF-κB es un factor de transcripción pleiotrópico que regula una amplia gama de procesos biológicos, incluyendo inflamación, inmunidad, diferenciación, crecimiento celular, tumorigénesis y apoptosis, y se expresa en casi todos los tipos celulares.
• El gen NFKB1 codifica la proteína precursora p105, que cumple una doble función: actúa como factor de retención citoplasmática para complejos de NF-κB, y sufre un procesamiento cotraduccional para generar la subunidad activa p50.
  Referencias relacionadas: PMID:1423592
• La subunidad activa p50 forma heterodímeros principalmente con RELA/p65 para formar el complejo NF-κB competente para la transcripción, que se une a la secuencia consenso de ADN κB 5'-GGRNNYYCC-3' en regiones potenciadoras de genes involucrados en respuestas inmunes y de fase aguda.
  Referencias relacionadas: PMID:1740106, PMID:7830764
• Dependiendo de la composición del dímero, los complejos de NF-κB pueden actuar como activadores transcripcionales (ej., p65-p50) o represores (ej., homodímeros p50-p50), proporcionando un control fino sobre la expresión génica.
• En células no estimuladas, NF-κB está secuestrado en el citoplasma por proteínas inhibidoras IκB; tras la activación por diversos estímulos, IκB se fosforila y degrada, permitiendo la translocación de NF-κB al núcleo.
• La proteína NFKB1 está sujeta a extensas modificaciones postraduccionales, incluyendo fosforilación, acetilación, hidroxilación, S-nitrosilación y ubiquitinación, que regulan su actividad, estabilidad e interacciones proteicas.
• La fosforilación en la serina 893 (S893) ocurre dentro del dominio C-terminal tipo IκB de p105, una región que típicamente se elimina durante el procesamiento proteasomal a p50, lo que sugiere un papel regulador en la retención citoplasmática o la dinámica de procesamiento de p105.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido fosfo-sintético correspondiente a los residuos que rodean a S893 de NFKB1 humano, lo que indica que el anticuerpo reconoce específicamente la forma fosforilada de NFKB1 en este sitio.
• Para inmunocitoquímica/inmunofluorescencia (ICC/IF), recomendamos utilizar protocolos de fijación y permeabilización apropiados que preserven el estado de fosforilación. La fijación con metanol o paraformaldehído puede ser adecuada; sin embargo, pruebe con y sin inhibidores de fosfatasas.
• Verifique la especificidad del anticuerpo pre-incubándolo con el péptido fosfo-inmunógeno o tratando las células con una fosfatasa antes de la tinción.
• Tenga en cuenta que el sitio de fosforilación S893 reside en el dominio C-terminal tipo IκB de p105. Este dominio se degrada durante el procesamiento proteasomal que genera la subunidad madura p50. Por lo tanto, se espera que el anticuerpo detecte p105 fosforilado (~105 kDa) y no el producto p50 escindido.
• Dado que la reactividad cruzada solo se ha demostrado para humano, valide el anticuerpo en las líneas celulares o tejidos humanos relevantes. Los niveles de expresión pueden variar entre tipos celulares y condiciones de estimulación.

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