Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-Fosfo-PAK1/2/3 (S144/S141/S139) para WB y ELISA - Q13153 / Q13177 / O75914

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de PAK1

• PAK1 (quinasa 1 activada por p21, alfa-PAK) es una serina/treonina-proteína quinasa que, junto con PAK2 y PAK3, pertenece a la familia PAK. Este anticuerpo reconoce la forma fosforilada del residuo de serina conservado equivalente a S144 en PAK1, S141 en PAK2 y S139 en PAK3, que son críticos para la activación de la quinasa.
• Activado por las GTPasas Rho CDC42 y RAC1, PAK1 conecta las señales extracelulares con vías intracelulares que controlan la dinámica del citoesqueleto, la adhesión celular y la migración.
  Referencias relacionadas: PMID:8805275 PMID:9528787
• PAK1 reorganiza el citoesqueleto de actina al promover la formación de fibras de estrés y adhesiones focales, regulando así la forma y la motilidad celular.
  Referencias relacionadas: PMID:9032240 PMID:9395435
• La quinasa regula la apoptosis a través de la fosforilación de RAF1, que a su vez fosforila BAD y promueve su secuestro mitocondrial.
  Referencias relacionadas: PMID:11733498
• Subcelularmente, PAK1 se localiza en el citoplasma, uniones celulares, lamélipodios, membranas de repliegue, invadopodios, núcleo y centrosoma, lo que coincide con sus múltiples funciones en la señalización y la estructura celular.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen autofosforilación en múltiples residuos de serina/treonina (incluido S144) y acetilación, que modulan la actividad y la localización.
• Clínicamente, PAK1 se sobreexpresa en el cáncer gástrico, promoviendo la invasión y la migración, y se ha relacionado con trastornos neurológicos.
  Referencias relacionadas: PMID:25766321

Guía experimental y consejos técnicos

• Para Western blotting, utilice cócteles de inhibidores de proteasas y fosfatasas durante la lisis de células/tejidos para preservar el estado de fosforilación. La banda esperada para PAK1 es de aproximadamente 65 kDa, pero pueden producirse ligeras variaciones de tamaño entre especies o debido a modificaciones postraduccionales.
• La especificidad de la señal de fosforilación se puede confirmar tratando las muestras con λ-fosfatasa o mediante ensayos de competición con péptidos utilizando el péptido inmunógeno no fosforilado.
• En ELISA, utilice un péptido fosforilado correspondiente al inmunógeno como antígeno de recubrimiento e incluya controles adecuados (péptido no fosforilado, blanco) para evaluar la especificidad del anticuerpo.
• Dado que el anticuerpo reconoce un sitio fosforilado conservado compartido por PAK1/2/3, es recomendable verificar la identidad de la isoforma en su sistema utilizando anticuerpos anti-PAK totales específicos de isoforma o el silenciamiento por ARNip.

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