Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-Fosfo-PKC alfa-T638 para WB, ELISA - P17252

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de PKC alfa

• La proteína quinasa C tipo alfa (PKCα) es una serina/treonina-proteína quinasa dependiente de calcio, fosfolípidos y diacilglicerol (DAG) que regula diversos procesos celulares, incluidos proliferación, apoptosis, diferenciación, migración, adhesión y angiogénesis.
• PKCα actúa en la regulación positiva y negativa de la progresión del ciclo celular; puede promover el crecimiento a través de la señalización RAF1/MAPK/ERK o inducir la detención del ciclo celular mediante la hiperfosforilación de RB1 y la inducción de inhibidores de CDK (CDKN1A, CDKN1B).
• La quinasa exhibe funciones anti-apoptóticas en células cancerosas al suprimir la activación de IGFBP3 mediada por p53/TP53 y fosforilar BCL2, contribuyendo así a la promoción tumoral en gliomas y cánceres de mama.
• PKCα juega un papel crítico en la biología cardiovascular: regula negativamente la contractilidad miocárdica, impulsa la hipertrofia de los cardiomiocitos a través de la señalización ERK1/2 y promueve la angiogénesis al mejorar la migración de células endoteliales y la proliferación inducida por VEGFA.
• En la función plaquetaria, PKCα media la liberación de gránulos dependiente de CD36/GP4 y la activación de la integrina ITGA2B-ITGB3 a través de la vía RAP1GAP, contribuyendo a la formación de trombos.
• La quinasa está involucrada en respuestas inmunitarias, incluida la diferenciación de macrófagos y la migración de células T inducida por quimiocinas; fosforila DOCK8 para regular la activación de CDC42. Referencias relacionadas: PMID:28028151
• La localización subcelular de PKCα es dinámica: se encuentra en el citoplasma, la membrana celular, la membrana mitocondrial y el núcleo, dependiendo del estado de activación y los estímulos.
• PKCα fosforila una amplia gama de sustratos, incluidos TNNT2/CTNT (regulando la contractilidad cardíaca), KLHL3 (modulando la estabilidad de WNK4 en respuesta a la angiotensina II) y LRRK1 (involucrado en el tráfico intracelular). Referencias relacionadas: PMID:25313067 PMID:36040231

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético que abarca Thr638 de la PKCα humana; la especificidad del anticuerpo para la forma fosforilada debe validarse comparando señales en muestras tratadas con fosfatasa versus no tratadas.
• Para Western blot, considere usar geles de SDS-PAGE de bajo porcentaje para resolver la proteína de 77 kDa, e incluya controles de carga apropiados junto con anticuerpos no fosfo-específicos de PKCα para evaluar los niveles totales de proteína.
• En aplicaciones de ELISA, investigue empíricamente las concentraciones de antígeno de recubrimiento y las condiciones de bloqueo; un ensayo de competición con fosfopéptido puede ayudar a confirmar la unión fosfo-específica.
• Dado que la activación de PKCα es transitoria y dependiente del estímulo, optimice los protocolos de estimulación celular (por ejemplo, PMA, factores de crecimiento) y asegure una preparación de muestras oportuna con inhibidores de fosfatasas.

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