Anticuerpo monoclonal de conejo anti-fosfo-PLK1-T210 para WB y ELISA - P53350

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de PLK1

• La serina/treonina-proteína quinasa PLK1, también conocida como polo-like kinase 1 y STPK13, es un regulador maestro de múltiples eventos durante la mitosis, incluyendo la maduración del centrosoma, el ensamblaje del huso, la transición G2/M, la función del cinetocoro, la cohesión de cromátidas hermanas, la salida de la mitosis y la citocinesis. Referencias relacionadas: PMID:11202906, PMID:12207013, PMID:12447691
• En el centrosoma, PLK1 fosforila sustratos clave como KIZ, NEDD1 y NINL para promover el reclutamiento del complejo de anillo de γ-tubulina y la formación del huso bipolar. Referencias relacionadas: PMID:16980960, PMID:19509060, PMID:12852856
• Durante la salida de la mitosis y la citocinesis, PLK1 crea sus propios sitios de acoplamiento en proteínas del huso central (PRC1, KIF20A/MKLP2) y fosforila ECT2, CEP55 y RACGAP1 para orquestar la formación del surco de segmentación. Referencias relacionadas: PMID:12939256, PMID:16247472, PMID:17351640, PMID:19468300, PMID:19468302
• Como regulador crítico del punto de control G2/M, PLK1 activa CDK1 mediante la fosforilación de CDC25C, ciclina B1 y el factor de transcripción FOXM1, mientras inhibe simultáneamente a los reguladores negativos WEE1 y PKMYT1/MYT1. Referencias relacionadas: PMID:11202906, PMID:12447691, PMID:12524548, PMID:19160488
• En el cinetocoro, PLK1 mantiene la señalización del punto de control de ensamblaje del huso y la cohesión de cromátidas hermanas mediante la fosforilación de BUB1B/BUBR1, FBXO5/EMI1, STAG2/SA2 y SGO1. Referencias relacionadas: PMID:15148369, PMID:15469984, PMID:17376779, PMID:18331714
• Más allá de la mitosis, PLK1 contribuye a la recuperación del daño del ADN y al silenciamiento del punto de control mediante la fosforilación de MRE11, RAD51, POLQ y RHNO1, y regula negativamente la estabilidad de p53 a través de la señalización de TOPORS. Referencias relacionadas: PMID:18615013, PMID:18662541, PMID:37440612, PMID:37674080, PMID:19473992
• PLK1 se localiza en el núcleo, centrosoma, cinetocoro, huso y cuerpo medio durante la división celular, y se expresa altamente en la placenta y el colon. Se clasifica como una fosfoproteína y una serina/treonina-proteína quinasa con funciones en el ciclo celular y la división celular (UniProt KB - P53350).

Guía experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo fue generado contra un fosfopéptido sintético alrededor de Thr210; por lo tanto, reconoce específicamente la forma fosforilada de PLK1. Confirme la especificidad de la señal tratando los lisados con λ-fosfatasa o utilizando mutantes de Thr210 no fosforilables.
• Para Western blotting, el peso molecular predicho es de ~68 kDa, pero la fosfo-PLK1 mitótica puede mostrar cambios de movilidad. Utilice lisados de células arrestadas en mitosis (p. ej., tratamiento con nocodazol) como control positivo, y células en interfase como control negativo.
• En aplicaciones de ELISA, el anticuerpo puede servir como reactivo de captura o detección para cuantificar los niveles de fosfo-PLK1 (Thr210). Optimice el tampón de recubrimiento, la concentración del anticuerpo y el sustrato de detección para su formato de placa específico.
• La reactividad cruzada se ha validado solo con PLK1 humana. Al trabajar con otras especies, verifique la homología de secuencia alrededor del epítopo Thr210 y verifique la reactividad experimentalmente.
• Para preservar la integridad del fosfo-epítopo, manipule las muestras con inhibidores de fosfatasa y evite el almacenamiento prolongado de lisados enriquecidos en fosfoproteínas.

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