Anticuerpo Policlonico de Conejo Anti-Fosfo-POLR2A CTD-S5 para WB, IHC-P, ELISA - P24928

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de POLR2A (RPB1)

• Como la subunidad más grande de la ARN polimerasa II, POLR2A/RPB1 forma el núcleo catalítico responsable de la síntesis de ARN dependiente de ADN, transcribiendo precursores de ARNm y ARN no codificantes (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596). Referencias relacionadas: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596

• Junto con la subunidad POLR2B/RPB2, forma el centro activo que presenta un motivo DxDGD coordinador de Mg2+ y proporciona corrección de pruebas exonucleasa 3'→5' para garantizar la fidelidad transcripcional (PubMed:30190596, PubMed:8381534, PubMed:9852112). Referencias relacionadas: PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112

• El dominio C-terminal (CTD) consta de 52 repeticiones tandem de heptapéptidos (YSPTSPS) y sufre fosforilación dinámica: la fosforilación de Ser5 (objetivo de este anticuerpo) promueve la escape del promotor, mientras que la fosforilación de Ser2 facilita la elongación y el procesamiento del ARNm (PubMed:24207025, PubMed:26124092). Referencias relacionadas: PMID:24207025 PMID:26124092

• Más allá de su función dependiente de ADN, POLR2A presenta actividad de ARN polimerasa dependiente de ARN, contribuyendo al metabolismo de ARN no codificantes y actuando como replicasa para el virus de la hepatitis delta.

• Localizado principalmente en el núcleo, POLR2A también se traslada al citoplasma y se asocia con cromosomas mitóticos, lo que refleja sus múltiples funciones regulatorias.

• Las mutaciones en POLR2A están vinculadas al trastorno del neurodesarrollo con hipotonía, discapacidad intelectual y rasgos faciales característicos (NEDHIB), lo que subraya su papel esencial en el desarrollo humano.

• Las modificaciones postraduccionales del CTD, incluidas la acetilación y metilación de residuos de lisina, proporcionan una capa regulatoria adicional para la expresión génica, siendo la acetilación crucial para la activación de genes de respuesta inmediata.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético diseñado para reconocer específicamente el residuo Ser5 fosforilado dentro del contexto de la repetición del CTD; se debe evaluar la reactividad cruzada con el péptido no fosforilado u otros epítopos fosforilados (por ejemplo, Ser2, Ser7) en el sistema de muestra correspondiente.
• Para el análisis de Western blot (WB), se espera una banda principal de ~217 kDa correspondiente a POLR2A de longitud completa; incluya inhibidores de fosfatasa en los buffers de lisis y electroforesis para preservar el epítopo fosforilado.
• En inmunohistoquímica (IHC-P), los métodos de recuperación de antígeno pueden afectar la estabilidad del epítopo fosforilado; pruebe protocolos suaves basados en citrato o EDTA y valide con controles fosforilados positivos y negativos adecuados.
• Las aplicaciones de ELISA pueden requerir la adsorción de péptido fosforilado en el pocillo y el bloqueo en condiciones que mantengan la especificidad del anticuerpo por el antígeno fosforilado.
• Se informa reactividad cruzada para muestras de humano, ratón y rata; sin embargo, dado que la secuencia de la repetición del CTD está altamente conservada, verifique la especificidad en su organismo modelo específico mediante alineación de secuencias si es necesario.

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