Anti-Fosfo-POLR2A CTD-S7 pAb de conejo para WB, IHC-P, ELISA, ChIP - P24928

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de POLR2A

• POLR2A, también conocida como RPB1 o POLR2, es la subunidad más grande de la ARN polimerasa II (Pol II), una ARN polimerasa dependiente de ADN responsable de sintetizar precursores de ARNm y muchos ARN no codificantes funcionales.
• Forma el núcleo catalítico junto con la segunda subunidad más grande, POLR2B, utilizando un motivo DxDGD de coordinación de Mg²⁺ para la polimerización de nucleótidos y una actividad exonucleasa 3'→5' para la corrección de pruebas. Referencias relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• El dominio C-terminal único (CTD) consta de 52 repeticiones en tándem de heptapéptidos (YSPTSPS) y sirve como plataforma para los reguladores transcripcionales. La fosforilación en Ser5 facilita la liberación del promotor, mientras que la fosforilación en Ser2 es necesaria para la liberación de la pausa y la elongación. Referencias relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• La acetilación de lisinas del CTD activa los genes de respuesta temprana inducidos por factores de crecimiento, mientras que la metilación y dimetilación reprimen la expresión de genes diana, ajustando finamente la salida transcripcional. Referencias relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A se localiza principalmente en el núcleo, pero también se detecta en el citoplasma y en los cromosomas, lo que es consistente con su papel dinámico en la transcripción.
• Actúa como una ARN polimerasa dependiente de ARN que extiende los ARN no codificantes y puede funcionar como una replicasa para el virus de la hepatitis delta.
• Las palabras clave asociadas con POLR2A incluyen fosfoproteína, acetilación, metilación, unión a ADN, unión a metales, transcripción, interacción huésped-virus y variante de enfermedad, reflejando su compleja regulación.
• Las mutaciones en POLR2A están relacionadas con trastornos del neurodesarrollo como la discapacidad intelectual (NEDHIB).

Orientación experimental y consejos técnicos

• Para western blot, utilice un gel SDS-PAGE de bajo porcentaje (por ejemplo, 6% o gradiente) y transferencia húmeda para garantizar una transferencia eficiente de la proteína de 217 kDa.
• Incluya cócteles de inhibidores de fosfatasas en los tampones de lisis para preservar la señal de fosforilación S7; considere el uso de un péptido no fosforilado o una muestra tratada con fosfatasa como control negativo.
• En IHC-P, optimice las condiciones de recuperación de antígenos (tampones a base de citrato o EDTA) y utilice un sistema de detección de polímeros para amplificar la señal.
• Para ELISA, emplee el péptido fosforilado como control positivo y el péptido no fosforilado correspondiente para confirmar la especificidad.
• En ChIP, entrecruce las proteínas con el ADN y fragmente la cromatina a fragmentos de 200–500 pb; el anticuerpo puede enriquecer la Pol II en los promotores de genes transcritos activamente.
• Valide el rendimiento del anticuerpo en la especie y el contexto tisular relevantes antes de experimentos a gran escala.

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