Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-Fosfo-Raf1-S259 para WB y ELISA - P04049

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de RAF1

• RAF1 (también conocido como c-RAF o Raf-1) es una serina/treonina proteína quinasa que actúa como eslabón regulador crítico entre las GTPasas Ras unidas a membrana y la cascada de señalización MAPK/ERK aguas abajo, controlando decisiones de destino celular como proliferación, diferenciación, apoptosis y supervivencia.
• Tras la activación, RAF1 fosforila y activa las quinasas de doble especificidad MEK1/2, que a su vez fosforilan ERK1/2, propagando señales que regulan la expresión génica y las respuestas celulares.
• RAF1 fosforilado (por ejemplo, en Ser-338 y Ser-339) fosforila directamente la proteína proapoptótica BAD, promoviendo la supervivencia celular. También fosforila las adenilil ciclasas (ADCY2/5/6) y modula la fosfatasa PPP1R12A.
• RAF1 influye en múltiples vías de señalización: puede promover la activación de NF-κB al mismo tiempo que inhibe efectores como ROCK2 (motilidad), ASK1/MST2 (apoptosis) y RB1 (proliferación/angiogénesis).
• Bajo estímulos apoptóticos, RAF1 puede translocarse a las mitocondrias, donde se une a BCL2 y desplaza a BAD, proporcionando un mecanismo antiapoptótico adicional.
• RAF1 participa en la migración celular al regular la señalización de Rho y es necesario para la cicatrización normal de heridas. También contribuye a la transformación oncogénica mediante la represión transcripcional de proteínas de unión estrecha como la ocludina (OCLN).
• La proteína se localiza predominantemente en el citoplasma y en la membrana celular, pero también se puede encontrar en las mitocondrias y el núcleo bajo determinadas condiciones.
• RAF1 se expresa en diversos tejidos; en el músculo esquelético, la isoforma 1 es más abundante que la isoforma 2.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido fosforilado sintético centrado en la Ser259 del RAF1 humano (P04049). Se espera que el anticuerpo resultante reconozca específicamente a RAF1 cuando está fosforilado en Ser259; confirme la especificidad comparando las señales entre muestras tratadas con fosfatasa y muestras sin tratar.
• Para Western blot (WB), utilice un extracto proteico de células humanas o de rata que se sabe que expresan RAF1. Se debe observar una banda de aproximadamente 73 kDa en condiciones reductoras. Incluya siempre controles positivos y negativos adecuados (por ejemplo, lisados ayunados de suero vs. lisados estimulados con factor de crecimiento).
• Para ELISA, valore el anticuerpo frente al péptido fosforilado inmunógeno y valídelo en una matriz biológica relevante para garantizar una detección lineal. Considere combinarlo con un anticuerpo contra RAF1 total para normalizar los niveles de fosforilación.
• Debido a que el anticuerpo se suministra en bolsas de hielo, evite ciclos repetidos de congelación-descongelación y almacénelo en las condiciones recomendadas para preservar su actividad.

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