Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Fosfo-Raf1 (S259) para WB, IP, ELISA - P04049

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de RAF1

• RAF1 (también conocida como c-Raf o Raf-1) es una serina/treonina proteína cinasa que actúa como un enlace regulador crítico entre las GTPasas Ras asociadas a membrana y la cascada de señalización MAPK/ERK, gobernando decisiones del destino celular como la proliferación, diferenciación, apoptosis, supervivencia y transformación oncogénica.
• Tras su activación, RAF1 inicia una cascada de proteínas cinasas activadas por mitógenos (MAPK) a través de la fosforilación secuencial de las proteínas cinasas de MAPK de doble especificidad (MAP2K1/MEK1 y MAP2K2/MEK2) y las cinasas reguladas por señales extracelulares (MAPK3/ERK1 y MAPK1/ERK2).
• RAF1 fosforila múltiples objetivos aguas abajo, incluyendo BAD (en Ser-75), adenil ciclasas (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (inhibiendo la actividad fosfatasa) y TNNT2 (troponina T del músculo cardíaco), modulando así la apoptosis, la señalización del cAMP y la función cardíaca.
• La proteína puede promover la activación de NF-kB e inhibir los transductores de señales implicados en la motilidad (ROCK2), apoptosis (MAP3K5/ASK1 y STK3/MST2), proliferación y angiogénesis (RB1), destacando sus amplios roles regulatorios.
• Se ha implicado a RAF1 en la transformación oncogénica de células epiteliales mediante la regulación por aumento del represor transcripcional SNAI2/SLUG, que disminuye la proteína de unión estrecha ocludina (OCLN), y restringe la activación de caspasas en respuesta a la estimulación por Fas, apoptosis de macrófagos mediada por patógenos y diferenciación eritroide.
• A nivel subcelular, RAF1 se encuentra en el citoplasma, la membrana celular, la mitocondria y el núcleo, y su translocación a la mitocondria permite la unión a BCL2 y el desplazamiento de BAD para proteger a las células de la apoptosis.
• La proteína contiene un dominio de dedo de zinc, está sujeta a fosforilación (incluyendo en Ser259, que este anticuerpo reconoce) y desempeña funciones en la cicatrización de heridas, la señalización Rho y la migración.
• En el músculo esquelético, la isoforma 1 es más abundante que la isoforma 2; RAF1 se asocia con enfermedades como la cardiomiopatía y la sordera (CMD1NN).

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético fosforilado que abarca la Ser259 de RAF1 humana. Este diseño teóricamente dirige el epítopo fosforilado; sin embargo, los usuarios deben validar la especificidad de fosforilación comparando las señales entre lisados tratados con fosfatasa y sin tratar en su sistema experimental.
• Dado que el anticuerpo se genera en conejo contra un péptido humano, no se garantiza la reactividad cruzada con otras especies; valídelo en el sistema de muestra relevante si se utilizan modelos no humanos.
• Para Western blot (WB), se espera una banda alrededor de 73 kDa. Utilice condiciones de bloqueo y lavado adecuadas para minimizar la unión inespecífica e incluya un control positivo (por ejemplo, lisados celulares estimulados) para confirmar la detección específica de fosforilación.
• En inmunoprecipitación (IP) y ELISA, el anticuerpo puede funcionar como se indica; considere optimizar las concentraciones de anticuerpo y las condiciones del tampón para su ensayo específico.
• Evite ciclos repetidos de congelación-descongelación; alícuote y almacene a -20°C o según lo recomendado.

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